[发明专利]一种制备脂肪干细胞外泌体的方法、脂肪干细胞外泌体及其应用有效
申请号: | 201910248434.6 | 申请日: | 2019-03-29 |
公开(公告)号: | CN109943533B | 公开(公告)日: | 2021-01-01 |
发明(设计)人: | 林嘉盈;黄嘉膂;蔡仁飞;匡延平 | 申请(专利权)人: | 上海交通大学医学院附属第九人民医院 |
主分类号: | C12N5/10 | 分类号: | C12N5/10;C12N15/85;A61K35/28;A61P15/00 |
代理公司: | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人: | 马小星 |
地址: | 200001 上海市黄浦区*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 制备 脂肪 干细胞 外泌体 方法 及其 应用 | ||
1.一种制备脂肪干细胞外泌体的方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)将脂肪干细胞与电转染工作液混合,得到混合液,将所述混合液与CTF1质粒混合,得到预转染物;
2)将所述步骤1)得到的预转染物进行电击,得到转染CTF1基因的脂肪干细胞;
3)将所述步骤2)得到的转染CTF1基因的脂肪干细胞进行常规培养后,收集脂肪干细胞外泌体;
所述收集脂肪干细胞外泌体的方法包括:
将所述转染CTF1基因的脂肪干细胞进行常规培养后,收集培养的上清液,将所述上清液依次进行第一离心、第二离心和第三离心后,得到的沉淀为脂肪干细胞外泌体;
所述第一离心的离心力为380~420xg;
所述第二离心的离心力为1800~2200xg;
所述第三离心的离心力为100000~140000xg;
所述第三离心的温度为1~5℃;
所述第三离心的时间为150min。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述脂肪干细胞的数量与电转染工作液的体积比为(1~3×105)个:(90~110)μl。
3.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述混合液的体积与CTF1质粒的质量比为(90~110)μl:(8~12)μg。
4.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述第一离心和第二离心的温度独立的为1~5℃;
所述第一离心和第二离心的时间独立的为8~12min。
5.一种脂肪干细胞外泌体,所述脂肪干细胞外泌体由权利要求1~4任一项所述的制备方法制备得到。
6.权利要求1~4任一项所述的制备方法制备得到的脂肪干细胞外泌体或权利要求5所述的脂肪干细胞外泌体在制备提高子宫内膜微血管内皮细胞增殖的药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述药物还包括脂肪干细胞外泌体在医学上可接受的辅料。
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