[发明专利]一种增强橡胶草抗除草剂的基因、介导载体及应用

说明书

一种增强橡胶草抗除草剂的基因、介导载体及应用。本发明增强植物抗除草剂性基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；含有本发明增强橡胶草抗除草剂基因的介导载体以及其在橡胶草遗传改良中的应用。本发明增强橡胶草抗除草剂性的基因用于在橡胶草遗传转化中，转化后橡胶草抗除草剂性能提高。

技术领域

本发明涉及一种基因、介导载体及应用。

背景技术

橡胶是重要的工业原料和战略物资，橡胶草虽然是一种天然的产胶植物，其产量无法与巴西胶树相比，无法满足工业需求，难以引起重视，20世纪中期，由于橡胶原料奇缺，曾引起苏联、美国、中国等对其形态结构、栽培技术及组织生理等方面进行研究，但分子生物学方面的研究较少。

发明内容

本发明提供了一种增强橡胶草抗除草剂的基因、介导载体及应用。

本发明增强橡胶草抗除草剂基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

含有上述的增强橡胶草抗除草剂基因的介导载体。其中介导载体为农杆菌。

上述增强橡胶草抗除草剂的基因用于橡胶草的遗传改良。

橡胶草属于匍匐生长，根部含有橡胶，普通的机械除草方式，会伤害到橡胶草根和叶子的生长，本发明的基因用于在橡胶草遗传转化中，其在芽上表达的更强烈，转化后橡胶草的抗除草剂性能好，除掉杂草的同时，不影响橡胶草的生长，利于根部橡胶的积累。

附图说明

图1是冻融法转化农杆菌中提取的DNA的结果图。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。

具体实施方式一：本实施方式增强橡胶草抗除草剂基因的核苷酸序列如SEQ IDNO：1所示。

本实施方式基因的提取方法如下：

1、增强橡胶草抗除草剂基因总DNA的提取：

(1)取5～20mL的CTAB提取缓冲液，68℃预热，其中CTAB提取缓冲液：2％CTAB、100mmol/L Tris-Cl、20mmol/LEDTA、1.4mol/L NaCl、2％体积的巯基乙醇，pH8.0；

(2)取0.5g发根农杆菌(Agrobacterium Rhizogenes,R1601)用液氮研成粉末，尽量研细，转移至Eppendorf管中，加入700μL预热的CTAB提取缓冲液，剧烈振荡混匀；

(3)加50μL的20％SDS，50μL的10％PVP和20μL的巯基乙醇，轻轻颠倒混匀，置于68℃水浴锅中30min；

(4)加入300μLCI抽提一次，12000rpm离心5min；

(5)取上清，加入300μLCI再抽提一次，12000rpm离心5min；

(6)取上清，加入等体积的异丙醇，4℃冰浴沉淀20～30min；

(7)12000rpm离心5min，去上清，沉淀加600μL 70％乙醇洗涤；

(8)8000rpm离心5min，去上清，沉淀置室温下待乙醇完全挥发；

(9)加入30～50μL双蒸水溶解沉淀，保存于-20℃。

2、增强橡胶草抗除草剂基因的克隆

以增强橡胶草抗除草剂基因的总DNA为模板，利用特异性引物，在设计引物时加上XbaI和SmaI两个酶切位点，其中特异性引物为：