[发明专利]一种基于miR-35的抗白斑病饲料添加剂及其在水产养殖上的应用

说明书

本发明公开了一种基于miR‑35的抗白斑病饲料添加剂及其在水产养殖上的应用。该添加剂包括以下按重量份数计的组分：miR‑35 0.02‑0.15份、纳米银溶液1‑3份、几丁质粉末20‑34份、菜籽饼2‑5份、柠檬酸钠15‑18份、酵母粉0.1‑0.4份、贝粉1‑3份、维生素E5‑8份、玉米粉15‑30份、维生素C1‑3份、花生壳粉15‑35份、桑葚叶提取物15‑25份、蛋白粉15‑24份、丙氨酸1‑3份、含硫化合物0.5‑4.2份。本发明利用对虾的miR‑35和纳米银溶液的系统作用，提高了miR‑35的表达量，再用于饲料中喂养水产动物，从源头上增强了各自的自身免疫力，降低了白斑病发生率。

技术领域

本发明属于对虾养殖领域，具体涉及一种基于miR-35的抗白斑病饲料添加剂及其在水产养殖上的应用。

背景技术

近年来，随着国家对水产养殖业的重视，以及受国外水产养殖技术的影响，我国的水产养殖业发展迅猛。目前，出现在虾体的疾病越来越多，其中白斑病尤为突出。而虾体的消化系统短而且细，消化吸收能力差，所以对喂养方式和用品的要求有所提高。

虾白斑症病毒病的病原体是一种无包涵体病毒，感染病毒的虾体症状病虾，首先停止摄食，反应迟钝，游泳不规则，时而在池边慢游或伏卧于水底，空胃，体色正常或变红(多为并发病)，头胸甲易剥离，甲壳上面有白色圆点，严重者白点连成白斑，在显微镜下观察白点呈重瓣的花朵状。这是本病的重要特征。

MicroRNA(miRNA)是小的非编码RNA，约由18-25个核苷酸组成，很多miRNA在不同物种中都是高度保守的。MiRNA是调控基因表达的重要因子，它们参与基因转录后水平的调控。它们通过种子序列与靶基因3’端非编码区域(3’UTR)直接结合，从而抑制靶基因的翻译或介导靶基因的降解。

虾苗入池对环境的要求高，如何从虾体本身上提高其免疫力，是值得探究的课题。

发明内容

针对现有的技术问题，本发明的目的在于提供一种基于miR-35的抗白斑病饲料添加剂及其在水产养殖上的应用，以miR-35为主要组分制备的添加剂，加入常规饲料中，喂养虾或蟹类，提高了水产自身的免疫力，尤其适合用于幼体的喂养。

一种基于miR-35的抗白斑病饲料添加剂，包括以下按重量份数计的组分：miR-350.02-0.15份、纳米银溶液1-3份、几丁质粉末20-34份、菜籽饼2-5份、柠檬酸钠15-18份、酵母粉0.1-0.4份、贝粉1-3份、维生素E5-8份、玉米粉15-30份、维生素C1-3份、花生壳粉15-35份、桑葚叶提取物15-25份、蛋白粉15-24份、丙氨酸1-3份、含硫化合物0.5-4.2份。

作为改进的是，上述基于miR-35的抗白斑病饲料添加剂，包括以下按重量份数计的组分：miR-35 0.12份、纳米银溶液2份、几丁质粉末28份、菜籽饼3份、柠檬酸钠16份、酵母粉0.2份、贝粉2份、维生素E6份、玉米粉24份、维生素C2份、花生壳粉30份、桑葚叶提取物22份、蛋白粉20份、丙氨酸2份、含硫化合物3.1份。

作为改进的是，所述miR-35的碱基序列为SEQ ID NO.1：5’-AACUGUGAGAAGUUCCGGU-3’。

作为改进的是，所述蛋白粉为植物蛋白。

具体地，上述基于miR-35的抗白斑病饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，将miR-35溶于磷酸盐缓冲液中，加入纳米银溶液，37℃下搅拌后5-8分钟，再加入几丁质粉末，继续搅拌后，喷雾干燥，得混合细粉A；

步骤2，将菜籽饼、柠檬酸钠、酵母粉、贝粉、维生素E、玉米粉、维生素C、花生壳粉、桑葚叶提取物、蛋白粉、丙氨酸和含硫化合物混合，加入去离子水搅拌，均匀后，喷雾干燥的混合细粉B；

步骤3，将混合细粉A和混合细粉B投入挤出机中挤出母粒，即得添加剂。