[发明专利]一株用于L-茶氨酸生产的基因工程菌及其构建与应用

权利要求书

1.一株合成L-茶氨酸的基因工程菌，其特征在于，是以大肠杆菌为宿主，通过以下改造获得：在其基因组上整合三拷贝的γ-谷氨酰甲胺合成酶基因gmas-Mu，该基因由trc启动子控制；单拷贝谷氨酸脱氢酶基因Cgl2079，该基因由trc启动子控制；单拷贝丙酮酸羧化酶基因Cgl0689，该基因由trc启动子控制；以及单拷贝柠檬酸合酶基因gltA，该基因由trc启动子控制；

所述γ-谷氨酰甲胺合成酶基因gmas-Mu，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示；

谷氨酸脱氢酶基因Cgl2079核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示；

所述丙酮酸羧化酶基因Cgl0689，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示；

所述柠檬酸合酶基因gltA，核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.4所示。

2.如权利要求1所述的一株合成L-茶氨酸的基因工程菌，其特征在于，所述宿主为大肠杆菌Escherichia coli ATCC 27325。

3.权利要求1或2所述基因工程菌的构建方法，其特征在于，采用CRISPR/Cas 9介导的基因编辑技术对大肠杆菌进行定向改造。

4.权利要求1或2所述基因工程菌在生产L-茶氨酸中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，发酵生产L-茶氨酸的方法如下：将种子液按照15-20％接种量接入新鲜的发酵培养基，发酵过程中控制pH稳定在7.0，温度维持在36-38℃，溶氧在25-35％之间；当培养基中的葡萄糖消耗完之后，流加700-800g/L的葡萄糖溶液并维持发酵培养基中的葡萄糖浓度＜2g/L，当OD₆₀₀＝15-25时开始以35-40mL/h的流速流加2.5-2.8mol/L的乙胺溶液，流加量为160-180mL/L培养基，发酵周期18-20h。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，发酵培养基组成为：葡萄糖15-25g/L，酵母提取物1-5g/L，胰蛋白胨1-5g/L，柠檬酸钠0.1-1g/L，KH₂PO₄ 1-5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.1-1g/L，FeSO₄·7H₂O 80-100mg/L，MnSO₄·H₂O 80-100mg/L，V_B1、V_B3、V_B5、V_B12、V_H各0.5-2mg/L，消泡剂2滴，其余为水，pH 7.0-7.2。