[发明专利]一种氧化酶检测试纸的制备方法

说明书

本发明提供的一种氧化酶检测试纸的制备方法，所用浸液配方中缓冲液廉价易配易得；浸液中底物对氧化酶有极高的灵敏度；辅助试剂过氧化氢、抗坏血酸、硫脲可以大大延长试纸的储存能力，有助于提高试纸的准确度；磷酸二氢钠‑磷酸缓冲液、甘氨酸‑盐酸缓冲液缓冲液、邻苯二甲酸‑盐酸缓冲液，为反应体系提供一个良好的反应环境。本发明采用浸渍干燥机自动化干燥方法制备检测试纸，浸渍干燥方式具有便捷、省时、可自动化的优势，有效控制试纸制备过程中人工误差带来的影响，浸渍干燥机主副加热，对温度全面进行监控，温度设定在规定的范围内，可以大大减少试纸批次之间的误差，保证试纸制备的准确性、稳定性及均一性。

技术领域

本发明属于体外诊断试剂技术领域，具体涉及一种氧化酶检测试纸的制备方法。

背景技术

生殖道感染是严重威胁女性身心健康的疾病，当女性机体免疫功能下降，内分泌功能紊乱，阴道的自然防御系统遭到破坏，阴道内微生态的有益菌减少，病原菌入侵导致感染性疾病的发生。在世界范围内，特别是发展中国家妇女患生殖道疾病的比例日益增大，常见的生殖道感染疾病有细菌性阴道炎(阴道加德纳菌、类杆菌等厌氧菌侵入)、霉菌性阴道炎(白色念珠菌侵入)、滴虫性阴道炎(阴道毛滴虫侵入)及淋病等。女性下生殖道感染是妇科门诊的常见病和多发病，常见的下生殖道感染主要有外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)、细菌性阴道病(BV)、滴虫性阴道炎(TV)以及淋病(GU)。

淋病是最常见的性传播疾病之一，在世界上广为流行，造成全球弥漫性危险，对人类的健康带来极大的危害。淋病的病原体是淋病奈瑟氏菌，又称作淋球菌，而人类是淋球菌的唯一天然宿主，其主要感染粘膜，尤其是对尿道粘膜有极强的亲和力。淋球菌入侵男、女尿道后，借助粘附因子粘附在上皮细胞表面进行繁殖。淋球菌感染后约有1％的男性无任何症状，75％的女性患者无症状，因此，仅凭无临床症状作为判断是否感染淋球菌的依据，漏诊率极高，尤其是女性，所以建立准确可靠的检测方法十分必要。淋球菌寄生于人体的生殖系统后，产生氧化酶，而氧化酶用于鉴定阴道分泌物中特定菌群，具有很高的敏感度和专属的特异性，阳性菌群包括福氏志贺氏4型、大肠杆菌、甲型副伤寒沙门氏菌、不动杆菌(洛菲氏生物型)、淋球菌奈瑟双球菌、卡他布拉汉氏菌(ATCC252ss)和黄杆菌(CDC3552)、铜绿假单胞菌等；阴性菌群包括产碱假单胞菌、粪产碱杆菌、木糖氧化无色杆菌、金黄色葡萄球菌(国内株和国外引进(ATCC25923)和肠球菌(ATCC2523)、变形杆菌、痢疾杆菌、大肠埃希杆菌等，目前，医学上淋球菌检测则利用淋球菌特异性酶系统在试管内产生气泡的多少判断阴阳性，由于女性生殖道分泌物中杂菌较多，利用“气泡法”存在非特异性，干扰试剂检测，所以本法不利于女性生殖道分泌物的检测。

目前面对淋球菌的检测方法主要集中于以下几种：

1)直接涂片染色法：取尿道分泌物涂片后做革兰氏染色，在镜下可见中性粒细胞内有革兰氏双球菌；

2)淋球菌的分离培养与鉴定培养法：分离与鉴定培养是目前世界卫生组织任务定推荐的筛选淋球菌的唯一方法，对症状轻微的男、女都很敏感。同时淋球菌抵抗力弱，对温湿度要求高，培养时操作技术非常重要，37℃烛缸法培养24小时后观察有圆形凸起、湿润光滑、半透明、灰白色的可疑菌落再进行鉴定实验；

3)氧化酶试验：以细菌产生细胞内氧化酶为基础，氧化酶反应是由于细菌存在细胞色素氧化酶系统，试验的目的是检测细菌氧化酶的存在。最初用于鉴定奈瑟氏菌属的菌种，以后广泛用于区别肠杆菌科与非发酵菌。氧化酶法原理是淋球菌具有氧化酶，它产生的氧离子能将氧化酶试剂(盐酸四甲基对苯二胺或盐酸二甲基对苯二胺)氧化成醌类化合物，出现颜色反应。

4)聚合酶链反应(PCR)，又称体外酶促扩增，是近几年发展起来的一项技术，是分子学技术的突破。它是在人工条件下模拟天然DNA复制过程，对特定DNA片段进行快速扩增，扩增后的产物能在分析仪下肉眼可见。该方法灵敏度高，特异性强，但是对所需试剂的质量和技术人员的素质要求高，且有极高的假阳性率和假阴性率，限制了其在基层医院的开展。

发明内容