[发明专利]一种卡介苗PhoPR基因过表达菌株的构建及其用途

说明书

本发明涉及构建一种新型PhoPR基因过表达的卡介苗（BCG）突变菌株及其用途。首次将含有BCG过表达PhoPR基因的载体转化入BCG，筛选并检测确定成功转化的菌株为新型PhoPR基因过表达的卡介苗（BCG）突变菌株。本发明涉及新型PhoPR基因过表达的卡介苗（BCG）突变菌株，即BCG：PhoPR菌株，该类菌株主要用于研究卡介苗PhoPR基因过表达的相关蛋白PhoPR在结核分枝杆菌在宿主内的生长、耐药性、渗透性调节、耐酸性、致病性等方面的作用，以及用于干预和治疗结核病的新型疫苗开发和研究。

技术领域

本发明属于重组基因，涉及一种卡介苗PhoPR基因过表达菌株的构建及用途。本发明涉及疫苗研究领域，构建卡介苗PhoPR基因过表达菌株，用于卡介苗PhoPR双组份系统相关蛋白PhoP/R过表达对新型卡介苗突变菌株毒力强度、免疫保护作用等方面的研究潜在和疫苗开发。

背景技术

结核病是由结分枝核杆菌(Mycobacterium Tubercμlosis) 感染引起的一种世界性传染病，也是单一致病菌感染导致死亡率最高的感染性疾病。目前结核病依然是全球感染性疾病的头号杀手。2018年9月18日世界卫生组织发布的《2018年全球结核病控制报告》公布的新数据显示：2017年全球估计有1000万人感染结核病，2013至2017年，全球结核病新增病例年均下降2%，2017年患病和死亡人数均为近年来低点，但结核病仍是全球最致命的传染病。其中160万人因结核病死亡，结核病新发病例，其中男性580万，女性320万例和儿童100万。总体而言，90%为成年患者（≥15岁），9%为HIV感染者（其中非洲占72%），2/3结核病患者来自于以下8个国家：印度（27%）、中国（9%）、印度尼西亚（8%）、菲律宾（6%）、巴基斯坦（5%）、尼日利亚（4%）、孟加拉国（4%）和南非（3%）。在WHO 30个结核病高负担国家中，上述国家和其他22个国家结核病患者数占全球结核病患者数的87%。而WHO欧洲区域（3%）和美洲区域（3%）仅占全球结核病患者的6%。据估计，全球23%的人口（约17亿）存在潜伏结核感染，因此他们一生中存有发展为活动性结核病的风险。结核病疫情未能获得控制，究其根本原因是缺乏有效的疫苗预防结核病的发生。

控制结核病的有效措施依然在于对结核病的有效预防，目前唯一应用于临床预防结核病的疫苗仍是卡介苗（bacille calmette-guerin，BCG），它是将牛型结核分枝杆菌不断传递230代而得到的减毒活菌疫苗，自从1921年问世以来，全球有超过40亿人次接种使用卡介苗每年约有1亿名新生儿使用接种预防，成为世界上应用最广泛的疫苗。卡介苗培养简单，价格低廉，其安全性相对较好，但在长期的应用过程中人们逐渐发现它的缺点和不足：1.WHO认为卡介苗的接种对于儿童严重结核病如结核性脑膜炎及粟粒型肺结核有较好的预防效果，但对成人结核病并无保护作用，但成年人是结核病的主要传播来源，因此卡介苗接种也不能降低结核病传播。2.保护效力并不稳定，并有相对应用禁忌症及不良反应。研究证实卡介苗对结核病的预防效果在不同地域不同人群差异较大，保护率为0～80%不等，因此有关卡介苗是否有效的争议一直都存在。3.对于先天性免疫低下的儿童及后天获得性免疫力缺陷患者在接种卡介苗后有可能导致严重的并发症或播散性结核病；4.在长期的传代过程中丢失一些重要抗原基因，免疫保护效力降低，另外接种卡介苗后还会对结核病患者的诊断结果产生一定的影响。

传统的卡介苗已经不能满足人类预防结核病的需求，各研究人员均在不断努力开发新型结核病疫苗。诸多新兴结核病疫苗均处于不同受试阶段，到目前为止仍没有一种疫苗可以成功的替代卡介苗而广泛应用于临床预防。结核分枝杆菌PhoPR双组分系统是结核分枝杆菌12个双组分系统中最为重要的双组分系统。它可使结核分枝杆菌感应外界环境变化，并做出相应反应的调控，同时对结核分枝杆菌在宿主体内的生长、分化、代谢、毒力、致病性以及耐药性等方面发挥着重要的调控作用。