[发明专利]一种枯草芽孢杆菌BSLN-08及其培养方法和应用

说明书

本发明公开了一种枯草芽孢杆菌BSLN‑08及其培养方法和应用，涉及微生物技术领域，具有高转化D‑葡萄糖生成D‑阿洛酮糖的能力，能够以葡萄糖为原料，显著降低D‑阿洛酮糖的生产成本。枯草芽孢杆菌BSLN‑08取枯草芽孢杆菌BSLN‑08接种于固体培养基中，制得活化菌株，在种子培养基中增殖培养后制得种子液，种子液在发酵培养基中扩大即得菌体发酵液。本发明首次获得与D‑葡萄糖水性溶液接触高产D‑阿洛酮糖的枯草芽孢杆菌BSLN‑08，与传统制备D‑阿洛酮糖的方法相比，此过程更加经济环保。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，尤其涉及一种枯草芽孢杆菌BSLN-08及其培养方法和应用。

背景技术

枯草芽孢杆菌，属芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7～0 .8×2～3微米，着色均匀。芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色至淡黄色，需氧菌，革兰氏阳性菌。

随着人们对健康饮食的日益重视，研发健康安全的低热量功能性甜味剂成为食品行业研究的重点。D-阿洛酮糖是近年发现的一种新型功能性稀少糖，其甜度相当于蔗糖的70% ,但能量只有蔗糖的0.3%，可以用作低卡路里减肥食品的甜味剂。它还示出重要的生理机能，例如活性氧种类清除活性和神经保护作用，它也可以用作肝脂肪生成酶和肠α-糖苷酶的抑制剂，用于减少体内脂肪累积。此外，D-阿洛酮糖还能够改善食品风味、外观等，延长食品的保存期限。2011 年美国FDA批准D-阿洛酮糖为GRAS物质。因此，D-阿洛酮糖这种健康安全的低热量功能性甜味剂已获得越来越多学者的关注，成为最具市场竞争力的新型甜味剂之一。

由于D-阿洛酮糖是一种较为稀有的天然单糖，从自然界中分离提取产量低，成本高，难以满足人们作为低热量健康甜味剂的需要，也不适宜工业化大生产的要求，因此为了应用于食品工业，需要有高效的D-阿洛酮糖生产方法。目前生物法制备D-阿洛酮糖最为有效的方法是使用将果糖转变为D-阿洛酮糖的酶。然而催化活性高的酶资源仍然很少，且果糖生产工艺复杂，技术要求高，导致成本较高不利于D-阿洛酮糖的普及推广。

葡萄糖是果糖的同分异构体，在自然界中分布最广,也是最重要的单糖。游离状态的葡萄糖存在于植物果实中, 动物中也有存在。葡萄糖是有机体能量的主要来源, 是许多糖类化合物的组成部分，在糖果制造业和医药领域有着广泛应用。结晶葡萄糖生产工艺简单, 过程容易控制, 成本低廉。

发明内容

本发明提供一种枯草芽孢杆菌BSLN-08及其培养方法和应用，枯草芽孢杆菌BSLN-08具有高转化D-葡萄糖生成D-阿洛酮糖的能力，以葡萄糖为原料，显著降低D-阿洛酮糖的生产成本。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种枯草芽孢杆菌BSLN-08，于2019年1月14日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.17169，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号 中国科学院微生物研究所。

枯草芽孢杆菌BSLN-08的原始菌株分离于广东省韶关市翁源县翁源广业食品科技有限公司附近甘蔗地的土壤，并经过诱变后获得。该菌株在LB培养基上形成的菌落呈微黄色，半透明，菌落表面粗糙，边缘不规整，呈波浪状。经显微镜观察，该菌株长约1.0～1.5微米，宽约0.6～0.9微米，无荚膜，周生鞭毛，芽孢位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。该菌株发酵培养后经简单的离心、洗涤即可得到粗酶制剂，与高浓度的D-葡萄糖（700g/L）水性溶液接触高产D-阿洛酮糖，可以显著降低D-阿洛酮糖的生产成本。

一种枯草芽孢杆菌BSLN-08的培养方法，步骤包括：

S1、取枯草芽孢杆菌BSLN-08接种于固体培养基中，在37℃的条件下，活化培养12h，制得活化菌株；

S2、取S2制得的活化菌株，接种于种子培养基中，在37℃的条件下，增殖培养12h，制得种子液；