[发明专利]一种简易的凤鲚染色体制备的方法

说明书

本发明涉及一种简易的凤鲚染色体制备的方法，属于细胞遗传学领域，所述方法包括：1)凤鲚取材装置及操作；2)样品低渗、固定和解离；3)滴片装置及操作；4)染色；本发明制备凤鲚中期分裂相染色体的方法简单快捷，整个流程仅需2～3小时，装置可灵活组装，且易操作，可随时随地开展，尤其适合养殖场、海边基地等不具备实验室条件的场合，制备的染色体制片干净明晰。

技术领域

本发明属于细胞遗传学领域，具体的涉及一种简易的凤鲚染色体制备装置和操作的方法。

背景技术

染色体是遗传物质的载体，研究物种染色体，不仅可以探讨其分类地位和系统演化，也有助于近缘物种的鉴定和群落分析，对资源的开发利用和遗传育种都有重要的意义。染色体分析还是各种动物遗传疾病诊断和性状变异研究的一个重要手段，更是染色体组操作育种必需掌握的一门技术。水产养殖业也常常需要掌握所培育物种的染色体组成及结构等信息。尤其近年来，海洋动物雌雄异形的现象吸引了大量专家的关注，性别决定机制的探讨也一直是生命科学研究中最具有吸引力和最热门的领域之一，是否存在性染色体是研究人员最想要了解的问题。20世纪前半叶，细胞遗传学的研究表明，性染色体在动物物种间，甚至非常相近种间都存在着变异，这意味着性染色体进化较快。之后的遗传学研究还发现，即使在一些染色体明显相同的种间，性别决定机制也显著不同，甚至还有研究发现性别决定机制在种内都存在差异。要想开展精确的细胞遗传学分析，染色体标本制备是最重要的一个环节，关键在于取材和滴片，优良的染色体制片是细胞遗传学研究的根本。

1966年，Ojima等(Ojima Y S，Hitotsumachi S,Makino.Cytogentic studies inlower vertebrates.Proc Jap Acad,1966,42(1):62-66)首次采用空气干燥法制片取得成功，目前的染色体制片都采用这种方法，但未经改良的这种制备方法又因为没有特定的装置，且制片步骤繁琐，很难制得染色体形态清晰且分散较好的片子，不能满足染色体相关分析的要求。

凤鲚(Coilia mystus)属于河口洄游性鱼类，是长江、珠江、闽江等江河口的主要经济鱼类，渔汛季节产量很高，长江口年产量曾高达5000t以上。刚孵化不久的仔鱼就在江河口的深水处肥育，以后再回到海中，翌年达性成熟，一般雌鱼体长略大于雄鱼。育肥期间生长速度最快，体内细胞分裂增生能力强，适合制备染色体，但凤鲚有个特点——性烈(应激反应十分强烈)，一旦被捕捞出水面就很快死亡，组织细胞的分裂增生能力也很快就消失，即便捕捞转移至岸上水体中存活时间也很短，一般不超过半小时，其染色体制备难度非常大，这也是迄今为止，尚未见有凤鲚染色体报道的原因。相关种类，如刀鲚(Coilianasus)(徐世杰，李园园，付官宝，吴昊伟，王倩，刘其根，曲宪成。刀鲚染色体核型分析，广东农业科学，2014年第41卷第7期，155-157页)和短颌鲚(Coilia brachygnathus)(洪汉云，周暾。短颌鲚的核型及其ZZ-ZO性染色体，遗传，1984年第6卷第4期，12-14页)已有染色体报道，且都认为雌雄染色体存在差异，其性染色体均报道为ZZ-ZO型，即雄性染色体数目为2n＝47条，雌性染色体数目为2n＝48条。这两种鱼染色体制备又都以肾组织为材料，其中刀鲚采用鳃-肾细胞的植物血球凝集素-秋水仙素法制备(实际结果仅限于肾细胞，而未提及鳃细胞情况)，短颌鲚则按照肾组织细胞培养、空气干燥或火焰干燥法制备，二者都有肾组织细胞培养环节，所需时间长且步骤繁琐，最终的结果也有待进一步验证。

因此，凤鲚染色体制备需充分考虑其本身的生物学特性，取材和前期处理只能就近原则，以确保凤鲚组织细胞在秋水仙素处理过程中仍保持一定的活力强度，方能制备出染色体。然而，就近的海边或捕捞渔船上研究条件大多简陋，不具备昂贵而又先进的分析仪器，迫切需要一种简易便捷的染色体制备装置以及操作步骤简单的方法。

发明内容