[发明专利]一种用于定量检测STAT3 mRNA水平的引物、探针和试剂盒

说明书

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种用于定量检测STAT3 mRNA水平的引物、探针和试剂盒,所述引物包括用于扩增STAT3基因的引物F1和引物R1、以及用于扩增对照基因GADPH的引物F2和引物R2。所述探针包括用于检测STAT3基因的探针P1和用于检测对照基因GAPDH的探针P2。所述试剂盒包括上述所述的引物和上述所述的探针。本发明的引物和探针特异性好，检测灵敏精确。本发明的试剂盒使用FAM和VIC双通道可对STAT3 mRNA的表达进行准确的定量分析，具有快速、简便、灵敏度高等检测优点。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种用于定量检测STAT3 mRNA水平的引物、探针和试剂盒。

背景技术

手足口病是由肠道病毒感染引起的，以发热和手、足、口腔、臀部等部位出现皮疹、疱疹或疱疹性咽峡炎为主要特征的一种常见于小儿的急性传染病。自2008年安徽省阜阳市出现手足口病暴发疫情以来，发病率呈现逐年上升，目前发病率位居于我国法定报告传染病的首位。手足口病已成为我国亟需解决的重大公共卫生问题。目前对重症HFMD仍没有好的标志物，轻症与重症临床转化的监测与治疗仍然是一个难点，寻找早期识别标志物及有效的靶向治疗手段，是降低该病死亡率的关键。信号传导与转录激活因子（STATs）为一类双功能分子，分子量为84～113kD之间，是一个可与靶基因调控区DNA结合胞质蛋白家族，其可与酪氨酸磷酸化信号偶联，既参与信号传导，又激活基因转录，从而发挥转录调控作用。我们研究发现重症手足口病样本中STAT3蛋白表达明显上调，可以作为重症手足口病早期识别诊断的分子标志物，本发明将荧光定量PCR技术方法，在mRNA水平检测STAT3蛋白表达情况，为重症手足口病的早期诊断提供了准确、快速、高效、敏感的检测方法。

发明内容

为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种用于定量检测STAT3 mRNA水平的PCR引物，该引物特异性好，检测灵敏精确。

本发明的另一个目的在于提供一种用于定量检测STAT3 mRNA水平的PCR探针，该探针特异性好，检测灵敏精确。

本发明的还一个目的在于提供一种用于定量检测STAT3 mRNA水平的PCR试剂盒，该试剂盒使用FAM和VIC双通道实时定量检测STAT3 mRNA含量，准确性好，灵敏度高。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种用于定量检测STAT3 mRNA水平的PCR引物，所述引物包括用于扩增STAT3基因的引物F1和引物R1、以及用于扩增对照基因GADPH的引物F2和引物R2，所述4条引物的核苷酸序列分别为：

F1：5’-TGTGACACCAACGACCTGC-3'

R1：5’-CCAAACTGCATCAATGAATCTA-3'

F2：5’-CCTGCCAAGTATGATGACATCAAGA-3'

R2：5’-GTAGCCCAGGATGCCCTTTAGT-3'。

本发明的另一个目的通过下述技术方案实现：一种用于定量检测STAT3 mRNA水平的PCR探针，所述探针包括用于检测STAT3基因的探针P1和用于检测对照基因GAPDH的探针P2，所述探针的核苷酸序列分别为：

P1：5’-ACCATTGACCTGCCGATGTCCC-3'

P2：5’-TGGTGAAGCAGGCGGCCGAG-3'；

其中，所述探针P1和探针P2的5’端均标记荧光基团，3’端均标记淬灭基团。

优选的，所述探针P1的5’端标记荧光基团FAM，3’端标记淬灭基团TAMRA。

优选的，所述探针P2的5’端标记荧光基团VIC，3’端标记淬灭基团TAMRA。