[发明专利]有效改善骨髓造血微环境的免疫细胞的制备方法

说明书

本发明公开了一种有效改善骨髓造血微环境的免疫细胞的制备方法，包括如下步骤：从血液中分离出血细胞；将血细胞置于0‑5摄氏度的箱体内培养1‑2小时；将血细胞置于细胞激活培养基中进行血细胞激活培养10‑20小时，以便得到初步扩增的血细胞；将血细胞置于至少一种细胞培养基中加入激活试剂进行血细胞培养10‑30小时，以便得到激活的血细胞；将激活的血细胞经过至少一次的生理盐水清洗，从而得到有效改善骨髓造血微环境的免疫细胞的制备方法。本发明具有能通过改善骨髓造血微环境达到治疗再生障碍性贫血等造血性疾病的效果的优点。

技术领域

本发明涉及医药领域，尤其是涉及一种有效改善骨髓造血微环境的免疫细胞的制备方法。

背景技术

再生障碍性贫血是一种骨髓造血功能衰竭症，主要表现为骨髓造血功能低下、全血细胞减少和贫血、出血、感染征候群。其中慢性再生障碍性贫血是一种发病缓慢，病程相对较长，非常难于治疗的血液系统疾病。再生障碍性贫血是由多种病因引起的以全血细胞减少为主要临床表现的造血功能衰竭综合征。我国与东南亚属于再生障碍性贫血高发地区，年发病率为欧美地区的2-3倍。根据中性粒细胞数量(0.5×109/L)、血小板数(20×109/L)及病情发病急缓，分为重型再生障碍性贫血(SAA)和非重型再生障碍性贫血，其中重型再生障碍性贫血患者中性粒细胞小于0.2×109/L为极重型再生障碍性贫血(VSAA)。SAA尤其是VSAA预后差，不及时采取有效治疗措施，患者可能因感染、出血而危及生命。再生障碍性贫血主要治疗措施包括异基因造血干细胞移植、联合免疫抑制治疗和支持治疗。其中HLA全相合同胞间异基因造血干细胞移植为治疗SAA的首选治疗方法。抗胸腺/淋巴细胞球蛋白(ATG/ALG)联合环孢素(CsA)的免疫抑制治疗(IST)是不适于异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)的SAA患者的首选治疗方案，可使60％-80％的患者完全或部分恢复自身造血。在中国，由于同胞供者的缺乏，近年IST作为SAA的一线治疗方案已越来越多地应用于临床。ATG治疗达到完全缓解(CR)时间相对较慢，50％患儿在ATG治疗12个月达到CR，90％患儿在24个月才能达到CR。在IST未取得治疗反应之前，需要继续输注血制品或者注射G-CSF。此外，ATG属于异种血清，可发生多种不良反应，包括即刻及迟发型变态反应。因此，本领域仍然需要改善骨髓造血微环境能用于治疗再生障碍性贫血的药物。

发明内容

有鉴于此，本发明目的在于提供一种能改善骨髓造血微环境用于治疗再生障碍性贫血的免疫细胞制剂。

本发明的目的是采用如下技术方案实现：

一种有效改善骨髓造血微环境的免疫细胞的制备方法，包括如下步骤：

从血液中分离出血细胞；

将血细胞置于0-5摄氏度的箱体内培养1-2小时；

将血细胞置于细胞激活培养基中进行血细胞激活培养10-20小时，以便得到初步扩增的血细胞；

将血细胞置于至少一种细胞培养基中加入激活试剂进行血细胞培养10-30小时，以便得到激活的血细胞；

将激活的血细胞经过至少一次的生理盐水清洗，从而得到有效改善骨髓造血微环境的免疫细胞的制备方法。

可选的，所述细胞激活培养基为添加了白介素-2和沙培林的无血清淋巴细胞培养基。

可选的，所述细胞激活培养基中添加了哺乳动物血清。

可选的，所述哺乳动物血清为哺乳动物胎血清。

可选的，所述激活试剂为钙离子载体。

可选的，所述钙离子载体选自A23187或离子霉素。

可选的，所述激活试剂为腺病毒。

可选的，所述血细胞包括从受试者获得的外周血单个核细胞。