[发明专利]一种CKAP4标记抗体-荧光微球复合物的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种CKAP4标记抗体-荧光微球复合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将荧光微球置于硼酸缓冲液中，加入EDC振荡活化；(2)离心，去上清，加硼酸缓冲液重悬沉淀，加入标记抗体，旋涡混匀；(3)向步骤(2)所得溶液中加入5％-15％BSA溶液振荡封闭，离心，去上清；(4)向步骤(3)所得沉淀中加入保护液，超声，振荡偶联，离心，去上清；(5)向步骤(4)所得的沉淀中加入5％-15％BSA溶液，振荡封闭，振荡结束后离心，去上清，沉淀用保护液吹散，即得所述CKAP4标记抗体-荧光微球复合物溶液。

2.根据权利要求1所述的CKAP4标记抗体-荧光微球复合物的制备方法，其特征在于，所述保护液包括0.02-0.08M pH＝8.0Tris-Hcl、0.3-0.8％TWEEN-20和0.05-0.15％BSA。

3.一种CKAP4免疫层析检测试纸条的结合垫的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将玻璃纤维膜用处理液处理、干燥；(2)将按照如权利要求1或2所述的方法制备得到的CKAP4标记抗体-荧光微球复合物溶液涂于经步骤(1)处理后得到的玻璃纤维膜上，37℃烘干。

4.根据权利要求3所述的CKAP4免疫层析检测试纸条的结合垫的制备方法，其特征在于，所述处理液包括0.005-0.015M pH＝8.0Tris-Hcl、0.05-0.15％Tween-20、0.05-0.15％BSA和3-8％蔗糖。

5.一种如权利要求3或4所述的方法制备得到的CKAP4免疫层析检测试纸条的结合垫。

6.一种CKAP4免疫层析检测试纸条，包括底板、样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和如权利要求5所述的结合垫。

7.根据权利要求6所述的CKAP4免疫层析检测试纸条，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线T线和质控线C线，所述T线处包被有1.0mg/mL-2.0mg/mL CKAP4包被抗体，所述C线处包被有1.0mg/mL-2.0mg/mL羊抗鼠抗体IgG。

8.根据权利要求6所述的CKAP4免疫层析检测试纸条，其特征在于，所述CKAP4标记抗体来源于CKAP4抗原表位肽多肽A，所述CKAP4包被抗体来源于CKAP4抗原表位肽多肽B，所述多肽A的氨基酸序列为RSHQDFSRQREEL，所述多肽B的氨基酸序列为DSHGPKEDGG。

9.根据权利要求6所述的CKAP4免疫层析检测试纸条，其特征在于，所述CKAP4标记抗体来源于CKAP4抗原表位肽多肽B，所述CKAP4包被抗体来源于CKAP4抗原表位肽多肽A，所述多肽A的氨基酸序列为RSHQDFSRQREEL，所述多肽B的氨基酸序列为DSHGPKEDGG。

10.根据权利要求6-9中任意一项所述的CKAP4免疫层析检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将所述硝酸纤维素膜粘贴在底板上；(2)分别在所述硝酸纤维素膜的两端粘贴所述结合垫和吸水垫，所述结合垫和吸水垫分别叠压在所述硝酸纤维素膜两端端部的上方；(3)将样品垫叠压在所述结合垫远离所述硝酸纤维素膜的一端的上方。