[发明专利]CCV病毒M蛋白的单抗及其制备方法、免疫胶体金试纸条的制备方法

权利要求书

1.一种CCV病毒M蛋白的单克隆抗体，其特征是：包括针对CCV病毒M蛋白的一对杂交瘤细胞株，其中第一个杂交瘤细胞株命名为2H11的保藏编号为CGMCC NO.17287，第二个杂交瘤细胞株命名为2G3的保藏编号为CGMCC NO.17288，2个杂交瘤细胞株均保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址均为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101；CCV病毒M蛋白的单克隆抗体，由所述的2个杂交瘤细胞株2H11和2G3分别产生。

2.一种免疫胶体金试纸条的制备方法，所述免疫胶体金试纸条中含有如权利要求1所述的CCV病毒M蛋白的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括由命名为2H11的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体2H11以及由命名为2G3的杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体2G3；

其特征在于，所述免疫胶体金试纸条的制备方法如下：

（1）胶体金抗体标记：在胶体金上标记所述的单克隆抗体2H11；具体方法为：用柠檬三钠还原法制备粒径为20nm的胶体金，用0.2mol/L K2CO3调到pH的浓度8.0，在磁力搅拌下逐滴加入纯化单抗100μg/ml 2H11，室温搅拌30min，加入10%(w/v) BSA溶液，使其终浓度为1%，室温继续搅拌均匀，然后依次缓慢滴入终浓度0.2% (w/v)PEG-20000，继续搅拌30min后，置于4℃静置2h；100rpm 4℃离心15min弃去底部未结合的杂质成分，取上清10000rpm 4℃离心30min，弃去上清；沉淀用原体积1/20含5%(w/v)蔗糖、1%(w/v) BSA、0.2%(w/v)PEG20000以及0.02%(w/v)叠氮钠的0.01mol/L pH9.2硼酸盐缓冲液悬浮；置于4℃保存备用；

（2）喷金：将步骤（1）标记好的胶体金喷到玻璃纤维上，制成金标垫；

（3）制作硝酸纤维素膜：将兔抗鼠IgG和所述的单克隆抗体2G3共同喷到硝酸纤维素膜上，制成对照线和检测线；

（4）将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜、吸水纸自下至上组装在PVC板上，然后切割制成试纸条；所述样品垫为空白的玻璃纤维素膜。

3.根据权利要求2所述一种免疫胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，所述兔抗鼠IgG的制备方法是：将小鼠IgG与弗氏完全佐剂混合乳化，背部皮下、皮内多点注射免疫健康家兔，经3次免疫后，检测血清效价，当琼脂凝胶沉淀试验AGP效价≥1:16时，采血，分离血清，加入饱和硫酸铵沉淀，透析后获得兔抗鼠IgG。