[发明专利]一种HMGB1封闭性抗体的制备方法及其应用在审
| 申请号： | 201910258174.0 | 申请日： | 2019-04-01 |
| 公开（公告）号： | CN109957015A | 公开（公告）日： | 2019-07-02 |
| 发明（设计）人： | 王红阳;李亮;陈磊;陈昕;凌妍 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军海军军医大学国家肝癌科学中心 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;C07K1/22;A61K39/395;A61K9/00;A61P1/16 |
| 代理公司： | 上海申新律师事务所 31272 | 代理人： | 车超平 |
| 地址： | 201805 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 封闭性抗体 制备 非酒精性脂肪肝 中和性抗体 杂种细胞 免疫原 小鼠 克隆 免疫BALB/C小鼠 抗原亲和层析 大肠杆菌 理论和实验 亲和色谱法 小鼠脾细胞 肝脏炎症 抗体筛选 临床应用 免疫应答 亲和层析 有效缓解 封闭性 融合 腹膜腔 腹水液 腹水 应用 蛋白 注射 验证 测试 对抗 封闭 证据 治疗 | ||
1.一种HMGB1封闭性抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤a、选取SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列中的至少一种作为免疫原，将所述免疫原在大肠杆菌中过表达，并采用Ni-亲和色谱法进行纯化；
步骤b、将步骤a中纯化后的免疫原免疫BALB/C小鼠，选取具有最佳免疫应答的小鼠，进行融合；
步骤c、将步骤b中的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合以产生杂种细胞，并稀释该杂种细胞混合物，在培养基中培养克隆，选择稳定的克隆；
步骤d、将杂种细胞注射到小鼠的腹膜腔中，收集10-14天后的腹水，采用蛋白A/G亲和层析或抗原亲和层析以纯化腹水液，获得HMGB1封闭性抗体。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤a中的采用的免疫原为SEQID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列，在步骤b中采用免疫原混合物免疫BALB/C小鼠。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤b中采用的BALB/C小鼠为8至12周龄的BALB/C雌性小鼠。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤c中培养克隆的方式为在HAT培养基中的微量滴定孔上由单亲细胞培养克隆。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述步骤d之后，验证所述HMGB1封闭性抗体的封闭性效果。
6.根据权利要求1所述的HMGB1封闭性抗体，其特征在于，所述HMGB1封闭性抗体为小鼠抗HMGB1单克隆抗体。
7.一种由权利要求1～6中任一项所述的制备方法制得的HMGB1封闭性抗体。
8.一种如权利要求7所述的HMGB1封闭性抗体在制备治疗非酒精性脂肪肝的药物中的应用。
9.一种如权利要求7所述的HMGB1封闭性抗体在制备缓解由非酒精性脂肪肝导致的肝脏炎症的药物中的应用。
10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述药物为注射剂型药物。
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