[发明专利]一种2型糖尿病的诊断引物及试剂盒、以及非编码RNA分子标志物的应用

说明书

本发明涉及一种2型糖尿病的诊断引物及试剂盒、以及非编码RNA分子标志物的应用。诊断引物包括miR‑802正向引物SEQ ID NO:3以及miR‑802反向引物SEQ ID NO:4；2型糖尿病的诊断试剂盒，包括该诊断引物；非编码RNA分子标志物为has‑miR‑802，或者为has‑miR‑802和has‑lncRNA‑ROIT；以上诊断引物、非编码RNA分子标志物能诊断糖尿病。本发明可利用诊断引物/诊断试剂盒，通过检测非编码RNA分子标志物来诊断2型糖尿病，检测方法操作简单，且灵敏度高，特异性强，对受检者的创伤性小，可用于早期和不同阶段2型糖尿病的诊断，具有明显的临床应用价值。

技术领域

本发明涉及一种2型糖尿病的诊断引物，同时还涉及含有该诊断引物的试剂盒、以及非编码RNA分子标志物的应用，属于细胞生物学和生物医学领域。

背景技术

糖尿病是一种由多种因素共同影响导致的以糖代谢紊乱为主要症状的慢性疾病。糖尿病虽可防可控，但糖尿病衍生的慢性血管并发症如微血管病变和大血管病变，外周血管和心血管疾病，外周神经病变，肾病等，严重危害患者身心健康，同时也给患者家庭以及个人带来沉重的精神和经济负担。并且，由于糖尿病复杂的发病机理，导致至今尚未找到根治的方法，患者为了稳定病情需要终身接受治疗。因此，早期诊断、治疗以及有效预防并发症，以提高患者生存率及生活质量成为亟待解决的问题。

糖尿病因发病机制不同，分为1型糖尿病(T1DM，胰岛β细胞自身免疫性破坏引发糖尿病绝对缺乏)，2型糖尿病(T2MD，因外周胰岛素抵抗引起的胰岛素敏感性下降)及妊娠糖尿病等^[1-2]。其中2型糖尿病约占糖尿病发病总数的90％-95％^[3]，是由遗传因素和环境因素相互作用产生的，由于胰岛素对肌肉、脂肪细胞、肝脏及胰岛β细胞敏感性降低导致胰岛素分泌不足，使机体长期处于高血糖状态，目前其发病机制尚不清楚。

非编码RNA(non-coding RNA ncRNA)是一大类不具有蛋白编码潜能的RNA转录本^[4]，主要包含短链非编码RNA(MicroRNA,miRNA)和长链非编码RNA(Long non-codingRNA,LncRNA)。miRNA是一种内源的短片段非编码RNA，约20-22个碱基的长度，广泛存在于哺乳动物中，通过与mRNA的3’UTR区(3’端非翻译区)，按照碱基互补配对原则结合，引起靶基因剪切或抑制靶基因的翻译，导致基因沉默，对靶基因的表达进行调控^[5-7]，进而调节各种生理进程，细胞功能，以及信号通路^[8-11]。LncRNA长度大于200个碱基，其序列的保守性比较低，但其在基因组中的定位和功能具有保守性。LncRNA可作为信号分子调控其他基因的表达；还可作为诱饵分子招募RNA结合蛋白，共同实现对目标基因表达的调控；还可作为引导分子引导RNA结合蛋白复合体定位到调控位点，调节目标基因的表达；还可作为支架分子招募多种染色质修饰复合体，实现对靶基因沉默作用，动态地调控基因的转录活性^[12-13]。目前已有大量的研究表明，非编码RNA在胰岛发育、胰岛细胞的凋亡、胰岛素的生成、分泌以及胰岛素作用等各个阶段参与糖尿病的发病，但研究手段多局限于动物模型或患病组织，且需要通过创伤性的方式获取。

发明内容

本发明的主要目的是：克服现有技术中存在的问题，提出一种2型糖尿病的诊断引物，能用于诊断2型糖尿病。同时，还提出含有该诊断引物的试剂盒，并提出非编码RNA分子标志物的相关应用。

本发明的主要技术构思为：发明人经调研发现，血液中存在着上万种非编码RNA，具有含量丰富、性质稳定、便于检测、且与特异性疾病存在着显著关联性等特点。血液中的非编码RNA由组织分泌，因此，血液中的非编码RNA的含量应能间接反映组织中的表达水平；在此基础上，通过无创性或低创性抽取血样的手段，以快速、灵敏、特异性的定量检测方法，筛选2型糖尿病人血液中特异性表达或异常表达的循环非编码RNA作为分子标志物，应能作为糖尿病早期的辅助诊断技术手段，从而为遏制当前爆发性的糖尿病发病趋势贡献重要的社会价值。