[发明专利]测序引物组及基于PCR的全基因组测序方法

权利要求书

1.一种测序引物组，其特征在于，所述测序引物组包括通用上游引物、通用下游引物及富集启动子下游引物；

所述通用上游引物的序列为：5’-T[barcode]CAAAXXXXNNN-3’；

所述通用下游引物的序列为：5’-GACTGCGTACGZZZZNNN-3’；

所述富集启动子下游引物的序列为：5’-GACTGCGTACYYNCTATA-3’；

其中，所述“XXXX”的长度为4个碱基，且碱基选自A、T、C和G中的至少一种；所述“ZZZZ”的长度为4个碱基，且碱基选自A、T、C和G中的至少一种；所述“barcode”的长度为4~6个碱基，且碱基选自A、T、C和G的至少一种；所述“N”为碱基A、T、C和G中的任意一种，所述“Y”为碱基C或T。

2.根据权利要求1所述的测序引物组，其特征在于，所述测序引物组中，

所述通用上游引物的序列为：5’-T[barcode]CAAACCGGNNN-3’，所述通用下游引物的序列为：5’-GACTGCGTACGAATTNNN-3’；或者，

所述通用上游引物的序列为：5’-T[barcode]CAAACGCGNNN-3’，所述通用下游引物的序列为：5’-GACTGCGTACGTATANNN-3’。

3.根据权利要求1或2所述的测序引物组，其特征在于，所述“barcode”选自CTTAT、GTAGA、CCTCG、GAACT和TTACT中的至少一种。

4.一种基于PCR的全基因组测序方法，其包括如下步骤：

制备待测样品的DNA；

提供权利要求1-3任一项所述的测序引物组，利用所述通用上游引物和通用下游引物对所述待测样品的DNA进行第一PCR扩增得到第一扩增产物，利用所述通用上游引物和所述富集启动子下游引物对所述待测样品的DNA进行第二PCR扩增得到第二扩增产物；

将所述第一扩增产物、第二扩增产物分别进行测序分析。

5.根据权利要求4所述的基于PCR的全基因组测序方法，其特征在于，所述第一PCR扩增的步骤包括：

先进行使通用上游引物和通用下游引物结合到所述待测样品的DNA上的结合扩增，然后进行富集目标区域的富集扩增。

6.根据权利要求5所述的基于PCR的全基因组测序方法，其特征在于，所述结合扩增包括94℃，5分钟；5个循环的如下反应程序：94℃，1分钟；35℃，1分钟；72℃，1.5分钟；和/或，

所述富集扩增包括35个循环的如下反应程序：94℃，1分钟；50~58℃，1分钟；72℃，1.5分钟；72℃，7分钟。

7.根据权利要求4所述的基于PCR的全基因组测序方法，其特征在于，所述第二PCR扩增的步骤包括：

先进行使通用上游引物和富集启动子下游引物结合到所述待测样品的DNA上的结合扩增，然后进行富集目标区域的富集扩增。

8.根据权利要求7所述的基于PCR的全基因组测序方法，其特征在于，所述结合扩增包括94℃，5分钟；5个循环的如下反应程序：94℃，1分钟；35℃，1分钟；72℃，1.5分钟；和/或，

所述富集扩增包括35个循环的如下反应程序：94℃，1分钟；50~58℃，1分钟；72℃，1.5分钟；72℃，7分钟。

9.根据权利要求4-8任一项所述的基于PCR的全基因组测序方法，其特征在于，所述制备待测样品的DNA的方法选自PCR试剂盒扩增法和制备裂解液裂解组织法中的任意一种。

10.根据权利要求4-8任一项所述的基于PCR的全基因组测序方法，其特征在于，将所述第一扩增产物定量至浓度为180-200ng/μL，以及将所述第二扩增产物定量至浓度为180-200ng/μL后，再分别进行测序分析。