[发明专利]一种体内、外放射性小肠损伤模型的建立方法

说明书

本发明提供一种体内、外放射性小肠损伤模型的建立方法，本发明目的通过如下方法实现。常规小鼠，待体重稳定后分组，麻醉好的小鼠标记处剑突和肋骨下缘至股骨的腹腔照射靶区，电离辐射射线照射靶区，照射后3‑5天取样，最佳照射剂量为4～8Gy。本发明体内外模型可相互印证，小鼠小肠和人小肠粘膜上皮细胞辐射损伤所需照射剂量基本一致。基于小鼠和人体正常细胞的放射性小肠损伤模型可用于相应的防治药物筛选研究和系统评价体系建立。

背景技术

肠道的辐射敏感性极高，电离辐射后快速发生破坏，尤以小肠最为严重，大肠次之。无论是事故辐照、还是医疗辐照，肠道均可以导致放射性肠损伤。日本原子弹爆炸后，68％的遇难者和21％的幸存者均出现严重的腹痛、腹泻、粘液血便等放射性肠损伤的症状；临床接受腹盆腔放射治疗的恶性肿瘤患者中，近80％在放疗后出现恶心、呕吐、腹胀、粘液血便等不同程度的放射性肠损伤症状。然而，放射性肠损伤的防治仍然是当今的棘手问题。核事故医学应急救援和临床放射治疗迫切需要低毒、高效的放射性肠损伤防治药物。在新药研发过程中，客观可靠的放射性小肠损伤体内外模型和评价系统尚待建立与完善。

现有的体内模型主要分为两种，一种为单次大剂量全身照射(≥8Gy)，其损伤多不可逆，且难以避免多系统衰竭所致动物死亡，现实应用时难以筛选出有效的放射性肠损伤防治药物。另一种为连续多次腹腔照射(2Gy/天，连续5天)，但造模时间长，不可控因素多。

发明内容

本发明目的在于提供一种体内、外放射性小肠损伤模型的建立方法，本发明目的通过如下方法实现。

常规小鼠，待体重稳定后分组，麻醉好的小鼠标记剑突和肋骨下缘至股骨的腹腔照射靶区，电离辐射射线照射靶区；照射后3-5天取样。

具体地，小鼠进入动物房后饲养1天，待体重稳定后分组，适应性喂养3天，腹腔注射戊巴比妥钠麻醉小鼠，将麻醉好的小鼠用苦味酸标记剑突和肋骨下缘至股骨的腹腔照射靶区后，平放到透明的独立固定盒中，至于水平树脂台上，以X射线或⁶⁰Coγ射线照射靶区。

电离辐射X射线的照射条件：源靶距1m，能量6MeV，剂量率400cGy/min；各组Balb/c小鼠腹腔分别接受2.0-12.0GyX射线的照射；

⁶⁰Coγ射线的照射条件：1Gy/min，源靶距1.05m；各组ICR小鼠腹腔分别接受2.0-8.0Gy⁶⁰Coγ射线的照射；

优选的照射剂量为4～8Gy。

附图说明

图1.Balb/c小鼠腹腔X射线照射图

图2.小鼠腹盆腔X射线照射后第5天一般状态图

图3.小鼠腹盆腔X射线照射后第5天腹腔解剖图

图4.小鼠受到不同剂量X射线腹盆腔局部照射后小肠的病理改变图(H&E染色，40×)

图5. ⁶⁰Coγ射线照射后小鼠小肠病理改变(H&E染色，100×)

图6.不同辐照剂量照射后10天内HIEC-6细胞增殖能力的改变

小肠粘膜代谢更新快，对电离辐射十分敏感，X射线和γ射线均属电离辐射。临床肿瘤放射治疗主要应用加速器产生的X射线,而核事故中γ射线的损害作用占有重要地位。相较于X射线，γ射线的波长更短、能量更大、频率更高、穿透能力更强、对生物的破坏力也更大。⁶⁰Co在衰变时，可以释放出γ射线。机体受到照射后快速发生损伤。脑型、肠型和骨髓型急性放射病均可出现小肠粘膜的坏死。小肠粘膜上皮细胞的自发性再生潜力较大，修复速度较快。在受到电离辐射后，若小肠粘膜上皮细胞的自发再生与修复能力大幅降低，则放射性小肠损伤难以自行恢复，需要药物的干预。