[发明专利]草鱼Akirin1基因、编码蛋白及其应用

说明书

本发明属于基因工程技术领域，具体公开了一种草鱼Akirin1基因、编码蛋白及其应用。本发明首次克隆获得草鱼Akirin1基因，并将该基因构建表达载体和重组大肠杆菌菌株，利用重组大肠杆菌菌种在体外获得大量表达的重组草鱼Akirin1蛋白，该编码蛋白和重组草鱼Akirin1蛋白可以用于制备适合淡水鱼类使用的免疫增强剂。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种草鱼Akirin1基因、编码蛋白及其应用。

背景技术

脾脏作为鱼类的重要免疫器官，也是血细胞发生、抗体产生和粒细胞生成的重要场所，兼有造血与免疫功能。Akirin是近年来发现的在骨骼肌生长发育和免疫反应中具有重要作用的基因。Akirin1在鱼类的脾脏、肝脏、头肾以及肾脏等组织中都有表达，在这些鱼类的免疫器官中表达可能与Akirin1在鱼类中发挥免疫功能有关。Akirin1可以通过NF-κB信号通路调节IL-6和TNFα的基因表达参与免疫调控作用。

草鱼（Ctenopharyngodon idellus）属鲤科（Cyprinidae），草鱼属（Ctenopharyngodon），为典型的草食性鱼类。因其生长迅速，饲料来源广，是中国淡水养殖的四大家鱼之一。草鱼以其肉质细嫩、个体大、肌间刺少而备受消费者喜爱；另外草鱼含有丰富的不饱和脂肪酸及微量元素具有抗衰老、养颜的功效。但草鱼在养殖过程中的“四病”（赤皮病、烂鳃病、肠炎病、出血病）制约着草鱼养殖的发展。长期的生产实践证明，草鱼免疫注射技术是当前能解决草鱼“四病”的一条有效途径。因此，开发草鱼免疫疫苗和免疫增强剂是解决养殖过程中“四病”的关键技术。

发明内容

本发明的目的是提供了一种草鱼Akirin1基因、编码蛋白及其应用。

本发明为实现上述目的采用如下技术方案，一种草鱼Akirin1基因，其特征在于：该草鱼Akirin1基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示。

一种草鱼Akirin1基因编码蛋白，其特征在于：该草鱼Akirin1基因编码蛋白的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:2所示。

本发明克隆了草鱼的Akirin1基因。克隆的方法是常规的基因克隆方法，利用同源物种的Akirin1基因在草鱼转录组数据库进行搜索，根据比对得到同源性最高的未注释基因片段设计克隆ORF的引物，PCR后把得到目的基因连接到pMD19-T载体为pMD19-T-Akirin1。

本发明构建了含有草鱼Akirin1基因的大肠杆菌表达载体。这个表达载体的构建方法是按照常规方法，利用自己所构建的载体pMD19-T-Akirin1为模板，通过PCR方法合成带有酶切接头的草鱼Akirin1基因，经酶切和分离纯化后接入到已有的载体pET22b的相应酶切位点EcoRI和NotI之间，即构建成所需的含有草鱼Akirin1基因的表达载体pET22b-Akirin1。

本发明还用上述含有草鱼Akirin1基因的表达载体构建了能够高效表达草鱼Akirin1基因的大肠杆菌重组菌株。