[发明专利]转基因油菜品系OXY235检测方法、试剂和试剂盒

权利要求书

1.一种转基因油菜品系OXY235的检测方法，其特征在于：包括以下步骤，

PCR扩增体系配制步骤，包括将品系OXY235特异引物组、品系OXY235特异探针、PEP基因特异引物组、PEP基因特异探针和待测样品的DNA加入到PCR反应液中，制成双重PCR反应体系；

微滴生成步骤，包括在双重PCR反应体系中加入微滴生成油，混匀后，将其转移到微滴生成仪上，震荡生成微滴；

PCR反应和微滴分析步骤，包括将微滴转移到反应管中进行PCR反应，PCR反应结束后，采用微滴分析仪读取每个微滴的扩增信号；

定量检测步骤，根据读取的扩增信号，采用软件分析品系OXY235的特异扩增拷贝数占内源参考基因PEP基因特异扩增拷贝数的百分比，以此表示转基因油菜品系OXY235的含量；

所述品系OXY235特异引物组的正向引物为Seq ID No.1所示序列，品系OXY235特异引物组的反向引物为Seq ID No.2所示序列，所述品系OXY235特异探针为Seq ID No.3所示序列，所述PEP基因特异引物组的正向引物为Seq ID No.4所示序列，PEP基因特异引物组的反向引物为Seq ID No.5所示序列，所述PEP基因特异探针为Seq ID No.6所示序列；

Seq ID No.1：5’-ATTGACCATCATACTCATTGCTGA-3’

Seq ID No.2：5’-AGAGAATCGTGAAATTATCTCTACCG-3’

Seq ID No.3：5’-CCATGTAGATTTCCCGGACATGAAGCC-3’

Seq ID No.4：5’-CCCTTGTGAAGCTCGACATC-3’

Seq ID No.5：5’-CTTGTCCTCTGACCATTCTTTGT-3’

Seq ID No.6：5’-CCGACCGTCACACCGATGTTTTAGA-3’

其中，Seq ID No.3所示序列的品系OXY235特异探针中，5’末端具有荧光基团，3’末端具有淬灭基团；Seq ID No.6所示序列的PEP基因特异探针中，5’末端具有荧光基团，3’末端具有淬灭基团。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述品系OXY235特异探针中，5’末端的荧光基团为FAM，3’末端的淬灭基团为BHQ-1；所述PEP基因特异探针中，5’末端的荧光基团为HEX，3’末端的淬灭基团为BHQ-1。

3.一种转基因油菜品系OXY235定量检测的试剂，其特征在于：所述试剂包括第一引物探针组合和第二引物探针组合，所述第一引物探针组合用于转基因油菜品系OXY235特异性检测，所述第二引物探针组合用于PEP基因特异性检测；

所述第一引物探针组合中，正向引物为Seq ID No.1所示序列，反向引物为Seq IDNo.2所示序列，探针为Seq ID No.3所示序列，并且探针的5’末端具有荧光基团，3’末端具有淬灭基团；

所述第二引物探针组合中，正向引物为Seq ID No.4所示序列，反向引物为Seq IDNo.5所示序列，探针为Seq ID No.6所示序列，并且探针的5’末端具有荧光基团，3’末端具有淬灭基团。

4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于：Seq ID No.3所示序列的探针中，5’末端的荧光基团为FAM，3’末端的淬灭基团为BHQ-1；Seq ID No.6所示序列的探针中，5’末端的荧光基团为HEX，3’末端的淬灭基团为BHQ-1。

5.根据权利要求3或4所述的试剂在制备转基因油菜检测试剂盒或检测设备中的应用。

6.一种转基因油菜检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中含有权利要求3或4所述的试剂。

7.根据权利要求6所述的转基因油菜检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒采用权利要求1或2所述的检测方法对转基因油菜品系OXY235进行定量检测。