[发明专利]一种亚单位融合蛋白CD2V-Fc及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种亚单位融合蛋白CD2V-Fc，其特征在于，所述亚单位融合蛋白CD2V-Fc含有非洲猪瘟病毒表面囊膜蛋白CD2V的胞外区和猪的抗体Fc蛋白；其中，所述非洲猪瘟病毒表面囊膜蛋白CD2V的胞外区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，其中所述猪的抗体Fc蛋白为猪的IgG的重链恒定区，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述亚单位融合蛋白CD2V-Fc的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的亚单位融合蛋白CD2V-Fc，其特征在于，所述亚单位融合蛋白CD2V-Fc还包括如SEQ ID NO1所示的氨基酸序列包括经过颠倒CD2V和Fc的顺序并且将Fc放置在氨基端的衍生的蛋白质。

3.根据权利要求2所述的亚单位融合蛋白CD2V-Fc，其特征在于，其中亚单位融合蛋白CD2V-Fc还包括在SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的氨基末端或羧基末端上连接的poly-Arg、poly-His、flag、c-myc和HA中的一种或多种标签氨基酸。

4.根据权利要求1所述的亚单位融合蛋白CD2V-Fc，其特征在于，所述非洲猪瘟CD2V的亚单位融合蛋白CD2V-Fc编码的基因序列如SEQ ID NO.4所示。

5.一种如权利要求1～4任一所述的亚单位融合蛋白CD2V-Fc的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

1)将如SEQ ID NO.4所示的非洲猪瘟CD2V的亚单位融合蛋白CD2V-Fc编码的基因克隆到真核表达载体中，以得到含有非洲猪瘟CD2V的亚单位融合蛋白CD2V-Fc编码的基因的重组质粒；所述真核表达载体为pEE6.4、pEE12.4、pGL4.13、pcDNA3.1，pcDNA3.3；

2)再将含有非洲猪瘟CD2V的亚单位融合蛋白编码的基因的重组质粒转染至CHO细胞中，以得到CHO细胞株；

3)通过培养、筛选、驯化步骤2)中所述CHO细胞株以得到高度表达的细胞株；

4)发酵培养步骤3)中所述高度表达的细胞株，纯化后得到重组非洲猪瘟CD2V的亚单位融合蛋白CD2V-Fc。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述非洲猪瘟CD2V的亚单位融合蛋白CD2V-Fc的表达系统为哺乳动物细胞，所述哺乳动物细胞为CHO细胞、293T细胞，所述CHO细胞为DG44、DXB11、CHO-K1、CHO-S细胞。

7.一种根据权利要求1-4任一所述的亚单位融合蛋白CD2V-Fc在制备用于诊断、预防和治疗非洲猪瘟的疫苗中的应用。