[发明专利]大鼠心尖切除诱导心肌再生模型的建立方法

说明书

本发明涉及一种大鼠心尖切除诱导心肌再生模型的建立方法，目的在于提供一种可重复的新生大鼠心尖切除术，对切除心尖大小达到可定量控制的目的。以出生后1天新生大鼠为实验对象，对现有心尖切除术进行改良。手术过程中和手术后通过对小鼠切除心尖体积进行定量，已达到手术稳定性和均一性。

技术领域

本发明涉及一种大鼠心尖切除诱导心肌再生模型的建立方法。

背景技术

心血管病高居我国居民总疾病死亡原因首位，且年患病率和死亡率仍处于上升阶段，是危害民众生命和健康的主要公共卫生问题。曾经由于缺乏对心脏再生领域的研究，人们普遍认为成年哺乳动物的心脏几乎不具有再生能力，因此当心脏遭受损伤时不能进行有效的修复。例如当心肌梗死发生时会造成心肌细胞的大量死亡，取而代之心肌成纤维细胞大量聚集在心肌细胞凋亡区域形成疤痕组织，严重的心肌纤维化，最终会导致心室重构直以及心脏功能下降乃至心力衰竭。因此心肌细胞的大量丢失是各种心血管疾病终末导致心力衰竭，危及生命健康的根本原因。已有研究发现，新生小鼠在出生后一周内心肌细胞具有短暂增殖能力。这一重大发现为探究哺乳动物心脏再生能力提供了相关策略，为研究心脏修复和心血管疾病的治疗提供了新的视角。因此探究新生哺乳动物心脏损伤后心脏再生的机制具有重要意义。

新生小鼠心肌损伤模型的提出为研究哺乳动物心脏再生提供了有力支持。目前较为普遍的心肌损伤模型有新生小鼠心尖切除模型（apical resection）、新生小鼠心肌梗死模型（myocardial infarction）和新生小鼠心脏冻伤模型（cryoinjury）。Porrello实验室于2011年发表在science上的文章第一次提出出生1天（P1）的新生小鼠在施行心尖切除手术后，能够诱导其心肌再生的能力，这种能力可以持续到出生后第7天（P7）。对出生1天小鼠施行心尖切除术3周后，可发现心尖缺失部位被修复，而且遗传谱系追踪研究发现这些用于修补缺失部位的心肌细胞绝大部分是由原有的心肌细胞增殖而来。

心尖切除带来的损伤可以刺激新生小鼠心肌细胞的增殖和心脏修复。根据Porrello实验中的描述，分别对P1天和P7天小鼠施行心尖切除手术，P1天小鼠心尖切除程度以左心室暴露为标准以达到实验可重复性，P7天小鼠心尖切除程度小于P1天小鼠。假手术组除不切除心尖外，其余步骤与手术组一致。与此同时，Mahmoud等人的实验中对新生小鼠心尖切除关键步骤的描述是：打开新生小鼠胸腔后，将心脏轻轻挤压出胸腔，之后用虹膜剪少量多次剪下心尖组织，直至左心室暴露，剪下的心尖约占左心室的15%。

目前所知道的心尖切除方法，未能对所切除心尖大小进行统一标准的定量；另一方面心尖切除过程中，手术器械的直接接触，以及反复多次的剪切会对心脏造成额外损伤，而这些附加的额外损伤势必会影响手术稳定性和均一性，进而影响对术后心脏的增殖效率评价的准确性。

Porrello和Mahmoud的文章中将小鼠心尖切除大小定量为左心室的15%并以左心室暴露为切除标准以达到实验可重复性，然而这种以暴露左心室为标准的方法有一定局限性。手术过程中新生小鼠左心室体积的15%是难以准确定量的。因此，设计一种简单可行并可以定量切除小鼠心尖的手术方法具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种大鼠心尖切除诱导心肌再生模型的建立方法，对切除心尖大小达到可定量目的。

为达到上述目的,本发明采用如下技术方案：

一种大鼠心尖切除诱导心肌再生模型的建立方法，其特征在于该方法的具体步骤为：

a.将新生大鼠置于冰盒内麻醉4-5分钟；

b.在新生大鼠腋下左胸口处做一0.4-0.6cm长水平切口，显微剪剪开肌肉暴露肋骨；

c.第四肋间隙打开胸腔，肋间隙开口使开口视野暴露心脏即可；