[发明专利]一种具有抑菌性的山楂寡聚半乳糖醛酸的制备方法

权利要求书

1.一种具有抑菌性的山楂寡聚半乳糖醛酸的制备方法，其特征在于以新鲜的山楂为原料，清洗后切碎打浆，与盐酸溶液按一定的质量比混合，热水浸提，离心取上清液，旋转蒸发浓缩，离心取沉淀，将沉淀冷冻干燥成山楂果胶粉，将所得山楂果胶粉在一定条件下酶解得到山楂果胶粗寡糖溶液，通过阴离子交换树脂分离纯化寡聚半乳糖醛酸，并通过牛津杯法进行抑菌实验，检测分离得到对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌具有抑菌性的寡聚半乳糖醛酸。

2.如权利要求1所述的一种具有抑菌性的山楂寡聚半乳糖醛酸的制备方法，包括以下步骤：

(1)原料的处理：选择新鲜的山楂，清洗后去核切碎，按2∶1山楂和水的比例打浆，放在冰箱中保存待用；

(2)提取果胶：取山楂浆与pH为2～3的盐酸按质量比1∶30～1∶40混合，70℃热水浸提50～90min，离心取上清液，旋转蒸发浓缩，用无水乙醇沉降，离心取沉淀，经过冷冻干燥得到山楂果胶粉；

(3)酶解：称取山楂果胶粉，溶于20～30倍质量的pH 7.4的PBS缓冲溶液中，加入0.1％～0.3％的果胶酶，50℃水浴2h，离心取上清液即为山楂果胶粗寡糖溶液，4℃冷藏待用；

(4)阴离子交换树脂预处理：取阴离子交换树脂，先用两倍体积的4％的氢氧化钠溶液浸泡2h，然后用两倍体积的4％的盐酸溶液浸泡2h，再用两倍体积的4％的氢氧化钠溶液浸泡2h，最后用蒸馏水反复冲洗直至中性；

(5)纯化：通过D201大孔强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂分离纯化寡聚半乳糖醛酸，将酶解后的山楂果胶粗寡糖上样，用多功能全自动部份收集器收集寡聚半乳糖醛酸；

(6)咔唑比色硫酸法测寡聚半乳糖醛酸含量：先用半乳糖醛酸标准品做标准曲线，再对样品进行测定，向试管中加入2mL硫酸，加入0.4mL待测样液，充分混匀，沸水加热10min，立即冷却，加入0.08mL咔唑，沸水加热15min，立即冷却，530nm比色测得吸光度值，对比标准曲线计算寡聚半乳糖醛酸含量；

(7)抑菌性研究：通过牛津杯法进行抑菌实验，将固体培养基倒入平板中，凝固之后放上牛津杯，将15～20mL有指示菌(大肠杆菌、枯草芽孢杆菌)的半固体培养基倒入平板中，待半固体培养基完全凝固之后拔掉牛津杯，在孔中加入50μL不同浓度的半乳糖醛酸，并加氨苄做阳性对照，加蒸馏水做阴性对照。培养观察抑菌圈直径，证明分离得到的寡聚半乳糖醛酸对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌具有抑菌性。