[发明专利]嵌合抗原受体和其治疗癌症的方法

权利要求书

1.分离的核酸，其包括编码嵌合抗原受体(CAR)的核苷酸序列，所述CAR包含：(a)抗原结合结构域，其包括NKG2D的a.a.82-216片段，例如为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；(b)跨膜结构域和(c)胞内信号传导结构域。

2.权利要求1的核酸，其中编码所述跨膜结构域的核苷酸序列包括编码CD8和/或CD28的跨膜结构域，优选为CD28的跨膜结构域的核苷酸序列，例如为SEQ ID NO：7的核苷酸序列。

3.权利要求1的核酸，其中编码所述胞内信号传导结构域的核苷酸序列包括编码CD28，4-1BB和CD3ζ的胞内信号传导结构域中的一个或多个的核苷酸序列，优选包括编码CD28，4-1BB和CD3ζ的胞内信号传导结构域的核苷酸序列，更优选包括编码从氨基端到羧基端按顺序为CD28、4-1BB和CD3ζ的蛋白质的核酸序列；

其中，

例如，编码CD28的胞内信号传导结构域的核酸具有例如SEQ ID NO：9的核苷酸序列；

例如，编码4-1BB的胞内信号传导结构域具有例如SEQ ID NO：11的核苷酸序列；

例如，编码CD3ζ的胞内信号传导结构域具有例如SEQ ID NO：13的核苷酸序列；

最优选的，其中编码所述CAR的胞内信号传导结构域的核苷酸序列具有如SEQ ID NO：20的核苷酸序列。

4.权利要求1的核酸，其中还包括编码(a)抗原结构域和(b)跨膜结构域之间的铰链区的核苷酸序列，优选为编码IgGH1的核苷酸序列，其具有例如SEQ ID NO：5的核苷酸序列。

5.权利要求1的核酸，其中还包括编码位于所述NKG2D片段的上游的前导序列的核苷酸序列，优选为编码CD33的前导序列的核苷酸序列，例如为SEQ ID NO：17所示的核苷酸序列。

6.权利要求1的核酸，其中还包括编码DAP10或其活性片段的核苷酸序列，例如为具有序列为SEQ ID NO：3的核苷酸序列，更优选的，在编码CAR和DAP10的片段之间具有IRES的核苷酸序列。

7.嵌合抗原受体(CAR)表达载体，其包含编码根据权利要求1-6中任一项的CAR的核酸，所述CAR包含：(a)抗原结合结构域，其包括a.a.82-216片段；(b)跨膜结构域和(c)胞内信号传导结构域。

优选的，其中包括编码位于所述NKG2D片段的上游的前导序列的核苷酸序列，所述前导序列的上游具有转录子，其可为Kozak片段，例如其序列为SEQ ID NO：16的核苷酸序列。

8.权利要求7的表达载体，其为病毒载体，例如杆状病毒表达载体，腺病毒载体，逆转录病毒载体，孢疹病毒载体或慢病毒载体，优选为慢病毒载体。

9.宿主细胞，其包含权利要求1-6中任一项的核酸或是权利要求7或8的表达载体，优选为T细胞，例如为CD4+T细胞或CD8+T细胞，更优选为由分离自受试者的T细胞衍生。

10.药物组合物，其含有权利要求1-6的核酸，或权利要求7或8的表达载体，或含有权利要求9的宿主细胞，其优选用于治疗或预防癌症，所述癌症可为白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤或实体瘤，例如白血病为急性淋巴细胞性白血病，急性骨髓性白血病，急性早幼粒细胞白血病，急性淋巴细胞性白血病，慢性骨髓性白血病，慢性淋巴细胞性白血病，单核细胞白血病和毛细胞白血病；淋巴瘤为：霍奇金淋巴瘤；非霍奇金淋巴瘤；伯基特淋巴瘤；和小淋巴细胞性淋巴瘤；实体瘤为膀胱癌、尿道、输尿管以及肾盂的尿道上皮细胞癌、多发性骨髓瘤、肾脏癌、乳癌、结肠癌、头颈癌、肺癌、前列腺癌、神经胶母细胞瘤、骨肉瘤、脂肪肉瘤、软组织肉瘤、卵巢癌、黑色素瘤、肝癌、食道癌、胰脏癌和胃癌，

更优选的，其中所述癌症为肝癌，

或者，

更优选的，其中所述癌症为肺癌。

11.权利要求1-6的核酸，或权利要求7或8的表达载体，或含有权利要求9的宿主细胞在用于制备治疗或预防癌症的药物中的用途。