[发明专利]一种腐败梭菌的培养方法

说明书

本发明公开了一种腐败梭菌的培养方法，是将腐败梭菌菌种接种于腐败梭菌培养基中，放置在厌氧培养箱中进行厌氧培养；所述腐败梭菌培养基，由以下重量份的原料制成：脑心浸液肉汤35‑40份、葡萄糖2‑4份、L‑半胱氨酸0.6‑0.8份、水1000份。本发明通过对培养基组成及培养环境条件的构建和优化，最大限度地满足了腐败梭菌快速生长繁殖的需要，能使腐败梭菌生长繁殖加快、培养物细菌密度加大。培养出的高浓度腐败梭菌可用于疫苗的制备，以预防羊快疫等腐败梭菌病。

技术领域

本发明涉及厌氧生物培养技术领域，具体涉及一种腐败梭菌的培养方法。

背景技术

腐败梭菌引起的畜禽疾病不仅发病率高，而且病程短促,死亡率高。该菌常以芽孢体形式散布于自然界中，易被免疫力低的家禽(如鸡)、家畜(羊、鹿等)动物感染，可引起传染性法氏囊病、腺病毒感染、呼肠孤病毒感染及鸡贫血，对于家畜可引起羊快疫等疾病，是严重危害养殖业的重要疾病，给各国畜牧业发展带来巨大经济损失。

在厌氧细菌的培养过程中，培养基的选择和气体环境的配比对于细菌的培养效果至关重要。因此，根据腐败梭菌的在生长代谢中的营养需求和气体环境需求，设计腐败梭菌培养基的营养成分及气体环境的含量和配比是工作的重要内容。

目前，一般市面上所销售的用于腐败梭菌培养的培养基是厌气肉肝汤，但是用其培养腐败梭菌浓度较低，且菌体生长缓慢。而广泛用于梭菌类细菌培养的肉肝胃酶消化汤制作工艺较为复杂，且常因原料问题影响细菌的培养效果。国内很多研究中采用液体石蜡封层，以隔绝氧气，但同时阻碍了腐败梭菌生长过程中与外界的气体交换。因此，在进行腐败梭菌的检验试验时，很多方法无法达到理想的培养效果。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种腐败梭菌的培养方法。本发明通过对培养基组成及培养环境条件的构建和优化，最大限度地满足了腐败梭菌快速生长繁殖的需要，能使腐败梭菌生长繁殖加快、培养物细菌密度加大。培养出的高浓度腐败梭菌可用于疫苗的制备，以预防羊快疫等腐败梭菌病。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种腐败梭菌培养基，由以下重量份的原料制成：

脑心浸液肉汤35-40份、葡萄糖2-4份、L-半胱氨酸0.6-0.8份、水1000份。

优选的，所述腐败梭菌培养基由以下重量份的原料制成：

脑心浸液肉汤38.5份、葡萄糖3份、L-半胱氨酸0.7份、水1000份。

本发明的第二方面，提供上述腐败梭菌培养基的制备方法，包括以下步骤：

将脑心浸液肉汤、葡萄糖和L-半胱氨酸溶于水中，充分溶解后，灭菌，冷却，即得。

优选的，所述灭菌具体为：121℃高压灭菌15min。

优选的，冷却至35-40℃。

本发明的第三方面，提供上述腐败梭菌培养基在如下1)-3)至少一项中的应用：

1)腐败梭菌的快速生长繁殖；

2)腐败梭菌菌种保藏；

3)羊快疫疫苗的制备。

本发明的第四方面，提供一种腐败梭菌的培养方法，包括以下步骤：

将腐败梭菌菌种接种于上述腐败梭菌培养基中，放置在厌氧培养箱中进行厌氧培养。

优选的，所述腐败梭菌菌种接种的体积比为2％。

优选的，所述厌氧培养箱中厌氧环境气体组成体积比为：氮气80％、氢气10％、二氧化碳10％。

优选的，所述厌氧培养条件为：37℃摇床培养12-24h；