[发明专利]一种用固定化的新型磷脂酶B于油脂脱胶的方法

说明书

本发明涉及一种用固定化的新型磷脂酶B于油脂脱胶的方法，特征在于先以介孔二氧化钛颗粒为载体，固定游离的磷脂酶B突变体，得到具有高活性和稳定性的固定化磷脂酶B突变体；然后对欲脱胶的植物油酸处理调pH到5.0‑6.0，再加入固定化磷脂酶B突变体和去离子水，在45℃下脱胶1‑4h,将脱胶的植物油升温至100℃，对酶灭活10min后,进行胶质分离，得到脱胶油。方法科学且合理，工艺简单且脱脂效率高，条件温和、无污染且油质量好，固定化磷脂酶B突变体的酶活较野生型磷脂酶B提高了30%，固定化磷脂酶B突变体脱胶后植物油的磷含量降至2mg/kg，且固定化磷脂酶B可以回收和重复使用，生产成本较低，易于实现连续化反应和自动化生产，有很强实用性。

技术领域

本发明涉及酶的基因应用工程技术领域，特别是一种用固定化的新型磷脂酶B于油脂脱胶的方法。

背景技术

脱胶是油脂精炼过程中的一个重要步骤，在传统的油脂脱胶工艺中，较多用的是水化脱胶法，由于其经济成本较高、物料能耗大和环境污染严重等原因而日趋淘汰。近些年来，业界致力于将酶法脱胶用于油脂精炼的脱胶环节中，有显著成效。酶法脱胶相较于传统的水化脱胶，具有条件温和、无污染、油质量高等优势，证明了该项技术在提高油脂工业的经济和环保效益方面均具有巨大的应用价值和潜力。但是由于来源于动物、植物、微生物的游离的磷脂酶B 资源有限、价格昂贵，而且在应用游离的磷脂酶B 进行反应时，只能应用一次、不能回收，故导致产物成本较高，从而限制了其在工业化生产中的应用。继后问世了一种“固定化酶”，它是指用物理或化学方法将酶绑定在一定空间范围内（俗称“固定化”）仍具有催化活性作用的酶制剂。事实证明，酶通过固定化后还可以提高活力和稳定性，更易于实现连续化反应和自动化生产，可重复利用，有利于提高利用率和降低生产成本，有一定的市场应用前景；同时，选择合适的固定化方法和选择合适的固定载体对酶的固定化过程及固定化酶的性能均影响较大和相当重要，例如固定化载体的几何结构（如比表面积、孔径、孔容等）、表面性质（亲疏水性）、表面活性（官能团种类和密度）、理化性质（物理、化学稳定性）对酶活性及稳定性均有直接影响。随着材料科学领域理论与技术的发展，人们掌握了介孔二氧化钛（TiO₂）材料良好的生物相容性，并应用到了生物传感、生物催化以及药物传输等领域的实践中，二氧化钛（TiO₂）的等电点在6.0-6.4左右，与细胞生理环境较为接近，因而是一种酶固定化的优良载体，但在实践中如何充分利用介孔二氧化钛（TiO₂）良好的生物相容性于油脂脱胶中，目前还在探索研究阶段，是业界正在致力攻克的一大难题。

发明内容

本发明的目的是要充分利用介孔二氧化钛（TiO₂）良好的生物相容性、以它为载体制备一种高活性及稳定性的固定化磷脂酶B突变体，并使之应用于油脂脱胶的方法。

本发明的一种用固定化的新型磷脂酶B于油脂脱胶的方法，特征在于以介孔二氧化钛（TiO₂）颗粒为载体固定游离的磷脂酶B突变体，制备得到固定化的新型磷脂酶B突变体，然后将所述的固定化的新型磷脂酶B突变体应用到油脂脱胶中，方法步骤如下:

步骤(1) 制备介孔二氧化钛（TiO₂）颗粒