[发明专利]一种定量总脂含量的分光光度法及应用

说明书

本发明公开了一种定量总脂含量的分光光度法及应用，依据脂质对酞菁聚集体的解聚机制，以四仲辛氧基镍酞菁为比色材料，石油醚为溶剂，准确定量总脂含量。分三步：(1)制作标准曲线。配制特定浓度酞菁溶液，以压榨花生油为标准脂质，无油样溶液为参照，在675nm分析，拟合吸光度和花生油浓度之间的坐标点，得线性方程。(2)脂质萃取。称量待分析样品，经萃取、蒸除溶剂和称量，回收脂质。(3)总脂定量。取酞菁溶液2.5mL，与0.5mL回收脂样混合，以无脂样溶液为参照，在特征波长下分析，去掉同体积脂样的吸收，代入线性方程，计算脂浓度，及相应的脂质量和总脂含量。与传统的萃取/称重法相比，该法更准确，能避免回收样中残留溶剂的影响。

技术领域

本发明属于仪器分析领域，涉及样品总脂含量的分光光度分析法，该方法中的酞菁比色材料性质稳定，特征吸收在可见光谱，一般不易受到分析体系的干扰。实验操作简单易行，线性标准曲线及线性方程易得，计算方便。分析结果较准确，相对于单纯的称重分析法，可以有效避免脂样中残存溶剂的干扰。

背景技术

脂质是一种能量贮存分子，广泛分布于生物组织细胞中，是生物细胞的结构成分之一。在食品行业，脂质含量是食品的一个重要营养指标。在生物化学研究和环境保护中，脂质含量是一个重要的生物指标，因为脂质代谢在生物体系中与其它代谢是相互关联的，污染物对于生物的污染会影响脂质的代谢，如有机持久性污染物，通常会造成生物细胞中脂质含量的增加。可见，脂质含量是一种重要的物理量，可用作营养、生化和生理学上的研究。那么，掌握生物样品中脂质的含量是非常重要的，但是，脂质是一类组成多样的生物质，包括非极性的三酰甘油酯、二酰甘油脂、单酰甘油酯和胆固醇，及极性较大的自由脂肪酸、磷脂和鞘脂，等等。脂质的这种成分和结构的多样性，给脂质的分析带来了极大的困难，要从多样的脂类分子中确定脂质分子的种类和数量，要求有先进的分析技术。尽管，现在色谱技术已经非常先进，能够分离和定量生物样品中的脂质，而且质谱技术也非常先进，可用于鉴定和定量脂质。但这些分析技术费用较高，并要求有较高操作技能的专门人员来进行，难以普及。

至今，传统的脂质分析方法是有机溶剂萃取称重的方法，也就是称量生物样品后，用低沸点的溶剂进行充分萃取脂质，然后蒸除溶剂，称量回收脂质的质量，计算得出脂质含量。实际上，这种分析方法分析的是总脂的含量。这种对于总脂的分析，一般即可满足对分析对象进行评估的要求。尽管如此，总脂含量的分析技术也在一直受到重视并得以改进，一方面是筛选有利于萃取脂质的溶剂或者使用按比例混合的溶剂，以提高脂质的萃取效率，减少分析的误差。另一方面是使用新的定量方法如色谱、光谱和其他特殊方法代替简单的称重方法，以避免称重方法中残存溶剂的干扰。时至今日，还没有找到可有效代替称重法的可行的方法，因为所谓的新方法在精确度、灵敏度和应用范围上有较大的局限性，不能用于通常的脂质分析，还需要进一步的深入研究。在定量方法中，有一种相对最为简单和方便的方法，即紫外可见分光光度法，这种光谱技术简易、稳定且使用费用低廉，再有，分光光度计在一般的实验室中都有这种仪器。虽然分光光度法定量总脂的研究已经有所开展，但是定量结果的准确性受到比色试剂的限制，比色试剂通常不能彻底地与脂质发生反应，造成比色结果不够准确。以此，至今传统的分光光度技术用于定量总脂含量尚不成熟，最大的局限性就是缺乏可用的比色试剂。假如有理想的比色试剂，能够对脂质的存在灵敏地做出相应，那么，就可能相应地发展为一种更准确地定量总脂含量的新方法。