[发明专利]一种提高陆地棉愈伤组织诱导率的方法

说明书

本发明公开了一种提高陆地棉愈伤组织诱导率的方法。本发明提供了一种获得棉花胚性愈伤组织的方法，包括如下步骤：1)将棉花外植体在愈伤诱导培养基中诱导培养，得到棉花愈伤组织；2)将所述棉花愈伤组织在愈伤组织分化培养基中继代培养，得到棉花胚性愈伤组织；所述愈伤诱导培养基包括2,4‑二氯苯氧乙酸、N6‑异戊烯腺嘌呤、吲哚乙酸和葡萄糖；所述愈伤组织分化培养基包括硝酸钾和葡萄糖。本发明的实验证明了与现有技术棉花胚性愈伤诱导时间需要4‑6个月相比，本发明可在3个月以内获取状态良好的胚性愈伤，为以愈伤组织为基础的高效扩繁体系及遗传转化体系研究提供重要的技术平台和支持。

技术领域

本发明属于植物愈伤组织诱导及培养技术领域，具体涉及一种提高陆地棉愈伤组织诱导率的方法。

背景技术

棉花是目前世界上重要的经济作物之一，是纺织产品的重要原料。随着人民生活水平的提高和纺织工业的飞速发展，常规育种生产的棉花已不能满足社会需求，需要进行转基因遗传育种来生产高产的棉花新品种。但棉花遗传转化技术一直属于植物基因工程领域的难点，受到多方面因素的限制，其中最主要的限制因素棉花初级愈伤组织与胚性愈伤组织的诱导。如何在提高棉花愈伤组织诱导率是技术瓶颈，因此，急需一种提高棉花愈伤组织诱导率的方法来在短期内高效获取大量棉花初级愈伤与胚性愈伤。

发明内容

为了解决解决现有技术中棉花愈伤组织诱导时间长、出愈率低的问题，填补了技术空白，本发明提供了如下技术方案：

本发明提供了一种获得棉花胚性愈伤组织的方法，包括如下步骤：

1)将棉花外植体在愈伤诱导培养基中诱导培养，得到棉花愈伤组织；

2)将所述棉花愈伤组织在愈伤组织分化培养基中继代培养，得到棉花胚性愈伤组织；

所述愈伤诱导培养基包括2,4-二氯苯氧乙酸、N6-异戊烯腺嘌呤、吲哚乙酸和葡萄糖；

所述愈伤组织分化培养基包括硝酸钾和葡萄糖。

上述方法中，

所述愈伤诱导培养基包括0.05-0.15mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、0.05-0.15mg/LN6-异戊烯腺嘌呤、0.05-0.15mg/L吲哚乙酸和20-30g/L葡萄糖；

所述愈伤组织分化培养基包括1.8-2.0g/L硝酸钾和20-30g/L葡萄糖。

上述方法中，

所述愈伤诱导培养基还包括用于组培的液体基本培养基和凝固剂；

所述愈伤组织分化培养基还包括所述用于组培的液体基本培养基和所述凝固剂；

或，所述愈伤诱导培养基由所述用于组培的液体基本培养基、0.05-0.15mg/L2,4-二氯苯氧乙酸、0.05-0.15mg/L N6-异戊烯腺嘌呤、0.05-0.15mg/L吲哚乙酸、20-30g/L葡萄糖和2-2.5g/L所述凝固剂组成；

或，所述愈伤组织分化培养基由所述用于组培的液体基本培养基、1.8-2.0g/L硝酸钾、20-30g/L葡萄糖和2-2.5g/L所述凝固剂组成。

上述方法中，

所述愈伤诱导培养基由所述用于组培的液体基本培养基、0.1mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、0.1mg/L N6-异戊烯腺嘌呤、0.1mg/L吲哚乙酸、25g/L葡萄糖和2.2g/L所述凝固剂组成；

或，所述愈伤组织分化培养基由所述用于组培的液体基本培养基、1.9g/L硝酸钾、25g/L葡萄糖和2.2g/L所述凝固剂组成；

或，所述凝固剂为结冷胶。

用于组培的基本培养基可以为MS或MSB，本发明的实施例中采用的是MSB。