[发明专利]一种基于质谱技术的血液免疫抑制药物浓度定量检测方法

说明书

本发明公开了一种基于质谱技术的血液免疫抑制药物浓度定量检测方法，涉及分析化学技术领域，包括以下步骤：配制包含待测免疫抑制药物的标准品工作液和同位素内标品工作液的混合工作液；取不同浓度梯度的所述混合工作液，加入全血标本和甲醇后混匀，超声提取后离心取上清液；将所述上清液用高效液相色谱串联三重四级杆质谱检测，获得标准品峰面积和各自内标品峰面积；以标准品工作液的浓度为横坐标，标准品峰面积和各自内标品峰面积的面积比为纵坐标绘制标准曲线；取待测全血标本，加入所述同位素内标品工作液按同样的方法取上清液并计算峰面积比代入标准曲线，对应的横坐标即为待测免疫抑制药物的浓度。本发明实现了对免疫抑制药物的精确检测。

技术领域

本发明涉及分析化学技术领域，尤其涉及一种基于质谱技术的血液免疫抑制药物浓度定量检测方法。

背景技术

器官移植是终末期器官衰竭的常见治疗手段。数据显示，中国每年约有1万例器官移植手术，累计移植量已超过10万例。其中，69％是肾脏移植，其次是肝脏、心脏、肺和胰腺等。受体免疫系统识别移植器官为外来组织而产生的排斥反应是移植术后最主要的挑战，也是移植物失功以及患者死亡的重要原因。

有效抑制移植器官后免疫系统出现的各种排斥反应是提高患者移植手术成功率的关键。免疫抑制药物(ISDs)可用于阻断不同作用机制的免疫系统，从而减少对移植物的排斥反应。过去30年，ISDs已经有效地抑制了患者移植术后的器官排斥反应，很好地改善了器官移植受体的存活率。近60％的成人肾移植患者存活率超过10年，肝移植5年存活率可达70～75％。

然而，免疫抑制药物的浓度必须保持在一个有效、安全的剂量范围内，才能起到对治疗的促进作用，ISDs浓度过高可导致机体严重的副反应，包括抑制患者对感染和肿瘤的免疫力下降；而ISDs药物浓度过低，则会产生器官排斥反应。此外，由于移植患者个体存在年龄、体重、胃肠道等功能差异，并受遗传因素、环境因素和药物间相互作用等诸多因素影响，造成药物在患者体内代谢过程存在较大的差异。

免疫抑制药物通常在一个非常窄而且又多变的治疗浓度水平，在用药时，要根据移植患者个体指标，来选择恰当的免疫抑制药物，并依据监测的药物浓度调整免疫抑制剂的用量，还要根据药物在体内的代谢情况来选择服药时间和给药途径。因此，定期进行免疫抑制药物浓度监测，对于器官移植患者药物治疗策略的选择具有重要的指导意义，可以辅助医生在非常窄的治疗窗内优化给药剂量，从而确保有效预防器官排斥反应的剂量，又能避免剂量过高导致严重副反应的发生。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于质谱技术的血液免疫抑制药物浓度定量检测方法，实现对免疫抑制药物的精确检测。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种基于质谱技术的血液免疫抑制药物浓度定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：配制混合工作液，配制包含待测免疫抑制药物的标准品工作液和同位素内标品工作液的混合工作液；

S2：制备上清液，取不同浓度梯度的所述混合工作液，加入全血标本和甲醇后混匀，超声提取后离心取上清液；

S3：获取峰面积，将所述上清液用高效液相色谱串联三重四级杆质谱检测，获得标准品峰面积和各自内标品峰面积；

S4：绘制标准曲线，以标准品工作液的浓度为横坐标，标准品峰面积和各自内标品峰面积的面积比为纵坐标绘制标准曲线；

S5：计算浓度，取待测全血标本，加入所述同位素内标品工作液和甲醇后混匀，超声提取后离心取上清液按照步骤S3获取待测免疫抑制药物的峰面积与内标品峰面积，将两者的峰面积比代入标准曲线，对应的横坐标即为待测免疫抑制药物的浓度。