[发明专利]一种阿司匹林药物相关基因基因多态性检测的引物组、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种阿司匹林药物相关基因基因多态性检测的引物组，其特征在于，包括，

GPIIIa(176)基因多态性的检测引物

5′-TCTTACAGGCCCTGCCTGT-3′ SEQ ID NO:1

5′-TTACAGGCCCTGCCTAC-3′ SEQ ID NO:2

5′-CAGAGCCCTTGTCGCTGA-3′ SEQ ID NO:3

PEAR1(1568697)基因多态性的检测引物

5′-TCTGCTG TCTCACTTCAA-3′ SEQ ID NO:4

5′-CTTCTGCTG TCTCACTTCTG-3′ SEQ ID NO:5

5′-CTAAACTCCAGCTCAGCT-3′ SEQ ID NO:6

内控的检测引物

5′-AGCAAGCAGGAGTATGACG-3' SEQ ID NO:7

5′-GAAAGGGTGTAACGCAACT-3' SEQ ID NO:8。

2.一种阿司匹林药物相关基因基因多态性检测的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的引物组、PCR缓冲液、阳性对照液和阴性对照液。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR缓冲液包括3’→5’外切酶活性高保真Taq酶、1.0-5.0mM的MgCl₂、1.0-5.0mM的dATP、1.0-5.0mM的dTTP、1.0-5.0mM的dGTP、1.0-5.0mM的dCTP以及SYBR Green I。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照液为GPIIIa质粒混合液以及PEAR1质粒混合液，GPIIIa质粒混合液含有带有待检测突变位点GPIIIa的等位基因，PEAR1质粒混合液含有带有待检测突变位点PEAR1的等位基因。

5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述阴性对照液为Tris-HCL缓冲液，所述的Tris-HCL缓冲液的浓度为7-13mM，pH为7.5-8.5。

6.一种阿司匹林药物相关基因基因多态性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤

步骤S1：对待检测样本抽提DNA样本；

步骤S2：取出适量PCR缓冲液，与各基因多态性的检测引物形成的野生型和突变型引物组、内参的检测引物组分别混匀形成各反应液，分装至反应管涡旋振荡10秒，2000rpm离心15秒，之后，分装至各PCR反应管；

步骤S3：取出适量PCR缓冲液，与各基因多态性的检测引物形成的突变型引物组分别混匀形成各阳性对照反应液，涡旋振荡10秒，2000rpm离心15秒，之后，分装至各PCR反应管；

步骤S4：取出适量PCR缓冲液，与各基因多态性的检测引物形成的野生型引物组分别混匀形成各阴性对照反应液，涡旋振荡10秒，2000rpm离心15秒，之后，分装至各PCR反应管；

步骤S5：加DNA样本，将DNA样本分别加入到步骤S2形成的各反应液的PCR反应管中，将各阳性对照液加入到步骤S3形成的对应的各阳性对照反应液的PCR反应管，将阴性对照液分别加入到步骤S4形成的各阴性对照反应液的PCR反应管中，将所有PCR反应管放入荧光定量PCR仪，设定反应条件，进行扩增反应，得到各扩增产物；

步骤S6：检测步骤S5形成的各产物的SYBR信号荧光强度，以SYBR信号荧光强度达到设定的阈值所需的循环次数Ct值作为相关突变基因存在的判断标准。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述的待检测样本包括手术切除的新鲜病理组织、甲醛固定石蜡包埋的病理组织、石蜡切片、全血、血浆、血清、胸腔积液、或口腔黏膜脱落细胞。