[发明专利]一种鸡呼肠孤病毒变异毒株BB18株

说明书

本发明提供一种鸡呼肠孤病毒变异毒株，为肉鸡呼肠孤病毒BB18株，已于2019年2月20日保藏于中国武汉、武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为保藏编号为CCTCC NO:V201908。本发明的鸡呼肠孤病毒BB18株可用于制备疫苗。本发明通过对采集的病料进行病原分离获得了一株鸡呼肠孤病毒，经过全基因组序列测定与分析、病毒中和试验以及动物回归试验，确定所筛选的病毒为我国白羽肉鸡上流行的呼肠孤病毒的变异株，该变异株处于一个独立的新进化分支，可用于制备灭活疫苗，为我国养禽场对该病的综合防控提供基础。

技术领域

本发明属于疫苗抗原微生物筛选技术领域，具体涉及一种鸡呼肠孤病毒变异毒株。

背景技术

鸡呼肠孤病毒(chicken reovirus,REO)又称“鸡病毒性关节炎”，各品种和日龄的鸡均可感染发病，其中以北方白羽肉鸡最为多见，该病不但可以水平传播，还可垂直传播，造成生产性能的极大降低，严重危害养鸡业的发展。禽呼肠孤病毒广泛存在并影响各种禽类，包括鸡、鸭，鹅，造成巨大的经济损失，特别是在肉鸡上造成病毒性关节炎、呼吸系统疾病、肝炎、心肌炎、免疫抑制和发育迟缓综合症等临床症状。呼肠孤病毒是一种分节段双链RNA病毒，病毒核酸不稳定，极易发生碱基突变、缺失或基因重组，从而导致新毒株的出现。近年来，我国水禽上不断的有新型变异呼肠孤病毒引起发病的报道，这些病毒都属于水禽源分离株，与鸡源分离株在基因组结构和致病性上有较大差异。而且考虑到已有的流行毒株会发生变异，导致已制备的疫苗保护效率下降。因此需要筛选新变异的病毒株来制备疫苗。

发明内容

本发明的目的是提供一种鸡呼肠孤病毒变异毒株，该病毒株相比于已报到的经典株发生了变异，能够用于制备疫苗。

本发明所提供的鸡呼肠孤病毒株，为肉鸡呼肠孤病毒BB18株，已于2019年2月20日保藏于中国武汉、武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为保藏编号为CCTCC NO:V201908；

本发明的鸡呼肠孤病毒BB18株可用于制备疫苗；

所述的疫苗为灭活疫苗。

本发明再一个方面提供一种灭活疫苗，是使用鸡呼肠孤病毒BB18株作为抗原制备的。

所述的灭活疫苗，其制备方法如下：

1)油相制备：取兽用白油95份，硬脂酸铝1份，置于油相制备罐中加热至80℃后，再加司本－80 5份，至温度达到115℃时，维持30min，冷却后备用；

2)水相制备：将灭活的鸡呼肠孤病毒BB18株抗原液96份与灭菌后的4份吐温-80混合，在水相制备罐中搅拌至吐温-80完全溶解；

3)乳化：取油相2份放于高速剪切机内，开动电机慢速转动搅拌，同时加入水相1份，以10000r/min，乳化5分钟。乳化后，取10ml，以3000r/min离心15分钟完成制备。

本发明通过对采集的病料进行病原分离获得了一株鸡呼肠孤病毒，经过全基因组序列测定与分析、病毒中和试验以及动物回归试验，确定所筛选的病毒为我国白羽肉鸡上流行的呼肠孤病毒的变异株，该变异株处于一个独立的新进化分支，可用于制备灭活疫苗，为我国养禽场对该病的综合防控提供基础。

附图说明

图1：BB18株接种SPF鸡胚后产生的病变，其中A:正常绒毛尿囊膜；B：增厚的绒毛尿囊膜；C：死亡鸡胚肝脏出血、坏死；D：死亡鸡胚典型脚趾出血；E正常胚；

图2：分离株BB18的RT-PCR鉴定图，其中M:DNA分子量标准；1：阳性对照；2和3为绒毛尿囊膜F3-BB18；N为阴性对照；