[发明专利]一种鉴定秋播大白菜珍绿6号种子纯度的引物及应用

说明书

本发明公开了一种用于鉴定珍绿6号秋播大白菜种子纯度的SSR标记引物，它为SEQ ID NO:1‑2所示的核苷酸序列。本发明进一步公开了利用SSR标记引物鉴定珍绿6号秋播大白菜杂交种纯度的方法。本发明提供的特异性引物及方法，可以在实验室3‑5小时完成珍绿6号大白菜杂交种纯度的纯度鉴定，具有快速、稳定、不受环境影响等优点，能替代传统田间种子纯度鉴定方法，有利于珍绿6号秋播大白菜种子的质量控制和该品种的进一步推广。

技术领域

本发明涉及大白菜珍绿6号杂交种种子纯度鉴定SSR分子标记的引物序列及应用，属于生物技术领域。

背景技术

大白菜（Brassica rapa L. ssp pekinensis）属于十字花科芸薹属，是我国最重要的蔬菜之一，长期以来在居民的菜篮子中占重要地位。种子纯度是确保优质大白菜品种能够高产稳产、保证品质的首要因素，传统的大白菜种子纯度鉴定方法一般采用田间直接鉴定的方式，通过在田间种植大白菜，待生长到一定的发育阶段，根据其生长特性判断种子纯度，具有周期长、受环境影响大，用工多等缺点，经常影响种子的正常销售。随着分子生物学的发展，分子标记辅助育种技术越来越多的应用于作物育种的全过程。筛选具有多态性的SSR分子标记，通过PCR扩增，在实验室内即可鉴定大白菜商品种的种子纯度，具有用时短、不受环境影响等优点，可广泛用于种子的纯度鉴定。

珍绿6号是天津科润农业科技股份有限公司蔬菜研究所育成的中熟直筒叠抱型大白菜品种，株高约52 cm，球高约40 cm，外叶深绿色亮泽且多皱无茸毛，心叶黄色，球形周正美观。生育期70~80天，适收期较长，中心柱偏圆，耐贮性好，是一个推广面积较广的秋播大白菜品种。前期珍绿6号种子纯度的鉴定，采用直接在田间种植、观察性状的传统方式进行，周期长、易受环境影响，经常影响种子的正常销售，开发一种可以快速、稳定鉴定种子纯度的方法，有利于珍绿6号大白菜种子的销售及进一步的推广工作。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测珍绿6号大白菜杂交种种子纯度的SSR标记的引物序列及应用，为实现该目的，本发明采用以下技术方案：

一种用于检测珍绿6号大白菜杂交种种子纯度的SSR标记的引物序列，其特征在于它为SEQ ID NO:1-2所示的核苷酸序列：

ACG TTA AGT TCA GGA ACT ATG CAG AGG SEQ ID NO:1

AAC TCT TGA CGA TGG GTT CAG TTG G SEQ ID NO:2。

本发明进一步公开了采用所述的特异性引物检测检测珍绿6号大白菜杂交种种子纯度的方法，其特征在于按如下的步骤进行：

（1）提取珍绿6号杂交种待测样品的基因组DNA；

（2）以上述样品的基因组DNA为模板，以SSR标记引物为特异性引物进行PCR扩增；采用的反应体系为：10 µL体系，包括：10×PCR Buffer，1.0 µL；2.5 mM dNTP，0.2 µL；10 µmol·L-1 primers，0.4 µL；5 U·µL-1 Taq，0.2 µL；50 ng·µL-1 DNA，1.5 µL；ddH2O，6.7µL。采用的扩增程序为：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，57℃复性30 s，72℃延伸30 s，35个循环；72℃终延伸 5 min。

（3）将上述PCR扩增获得的产物，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、银染；

（4）统计上述银染的结果：同时含有父本和母本双亲材料条带的种子为杂交种，只含有母本或父本材料条带的种子为非杂交种的种子。所检测珍绿6号杂交种纯度（%）=（检测种子总粒数-非杂交种粒数）/（检测种子总粒数）×100%。