[发明专利]一种用于检测肺炎衣原体的引物探针组合物、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于检测肺炎衣原体的引物探针组合物，其特征在于，包括用于扩增目的DNA片段的如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示序列的引物和如SEQ ID No.3所示序列的探针。

2.根据权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，还包括用于扩增内标DNA片段的如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示序列的引物和如SEQ ID No.6所示序列的探针。

3.根据权利要求2所述的引物探针组合物，其特征在于，所述内标DNA片段的序列如SEQID No.7所示。

4.根据权利要求1或2所述的引物探针组合物，其特征在于，所述探针的5'端标记荧光基团，所述探针的3'端标记淬灭基团；其中，所述荧光基团包括FAM、VIC、HEX、JOE、ROX、Cy5，所述淬灭基团包括BHQ1、BHQ2、TAMRA。

5.一种含有权利要求1或2所述的引物探针组合物的用于检测肺炎衣原体的试剂盒。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括反应液，所述反应液包括热启动酶和UNG酶。

7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性质控品和阳性质控品，所述阴性质控品为生理盐水，所述阳性质控品为Cpn标准菌株的菌悬液。

8.一种检测肺炎衣原体的方法，其特征在于，所述方法采用如权利要求5所述的试剂盒，所述方法包括以下步骤：

步骤1)样本的采集及提取，其中，所述样本在提取过程中加入内标，所述内标DNA片段的序列如SEQ ID No.7所示；

步骤2)将提取的样本置于PCR反应体系中进行PCR扩增反应，所述PCR反应体系包括反应液A和反应液B；其中，所述反应液A包括如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示序列的引物和如SEQ ID No.3所示序列的探针以及如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示序列的引物和如SEQ ID No.6所示序列的探针；所述反应液B包括热启动酶和UNG酶；

步骤3)根据扩增产物的Ct值，进行结果判定，其中：

样本Ct<35且有明显S型扩增曲线，其结果为阳性；

样本Ct≥35且无明显S型扩增曲线，内标Ct<35且有明显S型扩增曲线，其结果为阴性；

样本Ct≥35且无明显S型扩增曲线，内标Ct≥35且无明显S型扩增曲线，其结果为无效。

9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增反应程序为：50℃120s，95℃600s，1个循环；95℃15s，55℃45s，40个循环；37℃20s，1个循环。

10.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述PCR反应体系的总体积为20μL，其中反应液A 16μl；反应液B1μl；样本提取液3μL。