[发明专利]一种新型的酮基还原酶及其用于手性醇合成的方法

说明书

本发明公开了一种新型的酮基还原酶及其用于手性醇合成的方法，具体涉及生物技术领域，所述新型的酮基还原酶的第49位氨基酸残基、第127位氨基酸残基、第196位氨基酸残基、第324位氨基酸残基和第828位氨基酸残基发生突变；所述第49位氨基酸残基由G突变为C，所述第127位氨基酸残基由T突变为A，所述第196位氨基酸残基由A突变为E，所述第324位氨基酸残基由A突变为K。本发明本发明在实际制备手性醇时所需要的时间与现有技术相比大幅度缩短，有效缩短了制备手性醇所需要的时间，提高了手性醇的制备效率，适用于工业化生产以及实验室制备，适用范围更广。

技术领域

本发明涉及生物技术技术领域，更具体地说，本发明涉及一种新型的酮基还原酶及其用于手性醇合成的方法。

背景技术

因为手性仲醇是合成许多重要手性药物、农用化学品和天然产品的关键手性切块，从环境和可持续发展的角度，使用另一些价格低廉，容易获得化工原料来合成手性仲醇显然具有重要的意义。

专利申请公布号CN 106032347A的发明专利公开了一种合成手性醇的方法。包括如下步骤：在反应容器中，加入炔，金的氯化物[Au(L)Cl]，溶剂甲醇和水；反应混合物在110℃下反应6-12小时后到室温；再加入甲酸钠、水、过渡金属铑催化剂Cp*RhCl[(R，R)-TsDPEN]，反应混合物在30-40℃下再反应5小时后，冷却到室温，旋转蒸发出去溶剂，然后通过柱分离，得到目标化合物。该发明从商品化或容易合成的炔出发，直接得到的手性醇，反应展现出显著的优点：使用商品化或容易制备的炔为起始原料，通过串联反应直接得到手性醇，不需要分离中间体，避免溶剂，时间的浪费等等，因此，该反应符合绿色化学的要求，具有广阔的发展前景。

但是其在实际使用时，仍旧存在一些缺点，如其在加入过渡金属铑催化剂Cp*RhCl[(R，R)-TsDPEN]进行反应时，反应时间过长，进而影响了手性醇的制备效率。

发明内容

本发明克服现有技术存在的不足，所要解决的技术问题为：提供一种新型的酮基还原酶及其用于手性醇合成的方法，在实际制备手性醇时所需要的时间与现有技术相比大幅度缩短，有效缩短了制备手性醇所需要的时间，提高了手性醇的制备效率，适用于工业化生产以及实验室制备，适用范围更广。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种新型的酮基还原酶，所述新型的酮基还原酶的第49位氨基酸残基、第127位氨基酸残基、第196位氨基酸残基、第324位氨基酸残基和第828位氨基酸残基发生突变；

所述第49位氨基酸残基由G突变为C，所述第127位氨基酸残基由T突变为A，所述第196位氨基酸残基由A突变为E，所述第324位氨基酸残基由A突变为K，所述第828位氨基酸残基发生突变由C突变为A。

所述新型的酮基还原酶具体制备方法包括以下步骤：

S1：培养表达出所述新型的酮基还原酶的基因工程菌；

S2：将酮基还原酶由上述基因工程菌中分离。

所述G设置为甘氨酸，所述C设置为半胱氨酸，所述T设置为苏氨酸，所述A设置为丙氨酸，所述E设置为谷氨酸，所述K设置为赖氨酸。

所述第49位氨基酸残基由甘氨酸突变为半胱氨酸，所述第127位氨基酸残基由苏氨酸突变为丙氨酸，所述第196位氨基酸残基由丙氨酸突变为谷氨酸，所述第324位氨基酸残基由丙氨酸突变为赖氨酸，所述第828位氨基酸残基发生突变由半胱氨酸突变为丙氨酸。

所述基因工程菌的宿主细胞设置为大肠埃希氏菌MC1061。

本发明还提供了一种新型的酮基还原酶用于手性醇合成的方法，具体包括以下步骤：

S1、酮基还原酶制备：制备权利要求1所述的新型的酮基还原酶；