[发明专利]一种利用去离子甲酰胺促进杉木体胚发生的方法

说明书

本发明公开了一种利用去离子甲酰胺促进杉木体胚发生的方法，取继代状态良好的胚性愈伤组织接种到体胚诱导培养基上，于培养箱中进行暗培养，诱导促进杉木体胚发生；其中，体胚诱导培养基：以1/2DCR为基本培养基，附加有浓度不超过0.1134g/L的FD。本发明经试验证实低浓度的FD可以加快杉木体胚的发生，高浓度的FD会导致杉木胚性愈伤组织褐化死亡。当FD浓度为0.1134g/L时，体胚发生时间可缩短至35天，能高效快速的促进杉木体胚发生，具有很好的实用性。

技术领域

本发明属于植物组培技术领域，具体涉及一种利用去离子甲酰胺(FormamideDeionized，FD)促进杉木体胚发生的方法。

背景技术

杉木(Cunninghina lanceolata)隶属于杉科杉木属，是我国重要用材树种之一，其生长快、干形通直圆满，材质轻软细致，易加工，纹理美观，有特殊香气，不翘不裂，抗蛀耐腐，是建筑、家具、桥梁、造船、造纸及木纤维等工业的优良原材料[任海青，黄安民，刘君良，费本华.杉木加工利用研究进展及建议[J].木材工业，2006(01)：25-27.]。目前，主要通过三种途径繁殖杉木种苗：种子、扦插和传统组织培养[温亚锋.基于未成熟合子胚的杉木胚性组织诱导和继代的研究[D].福建农林大学，2011.]，但是良种种子产量、种子播种品质不稳定，第2代以上高级良种供应不足，且种子播种品质差，尤其是种子涩粒多，通常占重量的40％～60％[郑仁华.杉木遗传育种研究进展与对策[J].世界林业研究，2005(03)：63-65.]；而扦插育苗则受到母树穗条的多少、场地空间及生根率等方面的限制，其规模很难满足现代林业生产对杉木种苗的大量需求；此外，传统的组织培养根的诱导较为困难，诱导出的根数量少且弱，在一定程度上影响了苗木质量和造林的成功率。因此建立高效率的杉木未成熟胚的胚胎发生体系，有利于加快杉木速生优苗的产业化发展。

体细胞胚发生属于无性繁殖技术，生产出的种苗遗传背景差异小，苗木整齐。与扦插和传统组织培养相比，其规模更大、成本更低。采用未成熟的合子胚为外植体，进行体细胞胚胎发生的研究，研究表明，当未成熟合子胚处于胚胎选择阶段和优势胚阶段时，能够进行高频的体胚发生[宋春雷.杉木体细胞胚胎发生研究[A].中国林学会林木遗传育种分会.第六届全国林木遗传育种大会论文集[C].中国林学会林木遗传育种分会：，2008：2.]。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种利用去离子甲酰胺促进杉木体胚发生的方法，有效促进杉木体胚发生，缩短体胚发生时间。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种利用去离子甲酰胺促进杉木体胚发生的方法，取继代状态良好的胚性愈伤组织接种到体胚诱导培养基上，于培养箱中进行暗培养，诱导促进杉木体胚发生；其中，体胚诱导培养基：以1/2DCR为基本培养基，附加有浓度不超过0.1134g/L的FD。

所述的利用去离子甲酰胺促进杉木体胚发生的方法，体胚诱导培养基：以1/2DCR为基本培养基，附加有浓度不超过0.1134g/L的FD、5mg/LGA、0.45g/L谷氨酰胺、0.2g/L天冬氨酸、0.2g/L脯氨酸、5g/L肌醇、0.5g/L水解洛蛋白、170g/LPEG、2g/L活性炭、2.4g/L水晶洋菜、30g/L麦芽糖，pH为6.0。

所述的利用去离子甲酰胺促进杉木体胚发生的方法，体胚诱导培养基：以1/2DCR为基本培养基，附加有浓度不超过0.1134g/L的FD、6mg/LABA、5mg/LGA、0.45g/L谷氨酰胺、0.2g/L天冬氨酸、0.2g/L脯氨酸、5g/L肌醇、0.5g/L水解洛蛋白、170g/LPEG、2g/L活性炭、2.4g/L水晶洋菜、30g/L麦芽糖，pH为6.0。

所述的利用去离子甲酰胺促进杉木体胚发生的方法，体胚诱导培养基中附加有浓度为0.1134g/L的FD。

所述的利用去离子甲酰胺促进杉木体胚发生的方法，诱导培养35天以上。