[发明专利]一种基因组DNA测序文库快速构建方法及配套试剂盒

权利要求书

1.一种基因组DNA测序文库快速构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、选用DNase Ⅰ即脱氧核糖核酸酶I作为DNA片段化酶，对样本DNA进行酶切法片段化，得到片段化DNA；

步骤二、对步骤一得到的片段化DNA直接进行加dA尾，得到加dA尾的DNA；

步骤三、将步骤二得到的加dA尾的DNA与接头进行连接，得到接头连接产物；

步骤四、对接头连接产物进行磁珠纯化；

步骤五、对接头连接产物进行PCR扩增，得到扩增产物；

步骤六、对扩增产物进行磁珠纯化，得到基因组DNA测序文库产物；

步骤七、对文库产物，采用琼脂糖凝胶电泳检测法，进行片段分布检查和文库评价。

2.如权利要求1所述的基因组DNA测序文库快速构建方法，其特征在于，还包括以下步骤：

步骤八、完整建库测试优化：酶切片段化产物结合后续建库过程进行完整建库测试，从建库结果，即产量、文库大小等方面入手，进一步做相应的调整优化；

步骤九、对基因组DNA测序文库产物，进行高通量测序；亦即，选取不同GC含量的微生物基因组样本以及人的基因组样本进行高通量建库测序分析，通过分析覆盖率、GC偏好性、Q20、Q30等数据来综合评估此建库配套试剂盒。

3.如权利要求1所述的基因组DNA测序文库快速构建方法，其特征在于，按以下步骤进行：

1)、样本DNA片段化

取样本DNA作为片段化模板，加入酶切缓冲液、DNA片段化酶DNase Ⅰ即脱氧核糖核酸酶I，配制成反应体系进行片段化反应，得到片段化的gDNA；

2)、dA尾添加

向片段化的gDNA中加入da-尾添加缓冲液、da-尾添加酶，配制成反应体系进行dA尾添加反应，得到dA-尾添加产物；

3)、接头连接

向dA-尾添加产物中加入T4 DNA连接酶、连接促进剂、DNA接头，配制成反应体系进行接头连接反应，得到接头连接产物；

4)、接头连接产物磁珠纯化

将上一步得到的接头连接产物，通过DNA分选磁珠，以0.8x的磁珠比例进行纯化回收；

5)、PCR扩增

向上一步得到的纯化回收的接头连接产物中加入高保真DNA聚合酶、聚合酶缓冲液，配制成反应体系进行PCR扩增反应，得到PCR扩增产物：

6)、扩增产物磁珠纯化

将上一步得到的PCR扩增产物，通过DNA分选磁珠，以0.9x的磁珠比例进行纯化回收，得到基因组DNA测序文库产物；

7)、对上一步得到的文库产物，用琼脂糖凝胶电泳检测文库大小，进行片段分布检查和文库评价。

4.如权利要求3所述的基因组DNA测序文库快速构建方法，其特征在于，还包括以下步骤：

8)、完整建库测试优化：酶切片段化产物结合后续建库过程进行完整建库测试，从建库结果，即产量、文库大小等方面入手，进一步做相应的调整优化；

9)、对基因组DNA测序文库产物，进行高通量测序；亦即，选取不同GC含量的微生物基因组样本以及人的基因组样本进行高通量建库测序分析，通过分析覆盖率、GC偏好性、Q20、Q30等数据来综合评估此建库配套试剂盒。