[发明专利]桂枝芍药知母汤的检测方法

说明书

本发明提供了一种桂枝芍药知母汤的检测方法，它是采用高效液相色谱法检测，其操作步骤如下：1)参照物溶液的制备：取没食子酸、芒果苷、芍药苷、升麻素苷、甘草苷、5‑O‑甲基维斯阿米醇苷、肉桂酸和甘草酸铵对照品，分别加甲醇溶解，作为参照物溶液；2)供试品溶液的制备：取桂枝芍药知母汤冻干粉，加甲醇溶解，即得供试品溶液；3)分别吸取参照物溶液和供试品溶液注入液相色谱仪。本发明方法不仅可用于检测没食子酸、芒果苷、芍药苷、升麻素苷、甘草苷、5‑O‑甲基维斯阿米醇苷、肉桂酸和甘草酸铵，还能实现桂枝芍药知母汤的整体质量控制，进一步还能为桂枝芍药知母汤物质基础的研究提供方法依据，具备推广应用价值。

技术领域

本发明具体涉及桂枝芍药知母汤的检测方法。

背景技术

桂枝芍药知母汤出自《金匮要略·中风历节病脉证治篇》，由桂枝、芍药、知母、甘草、防风、白术、麻黄、生姜、麻黄九味药组成，是治疗痹症的经典名方，具有祛风除湿、温经散寒、滋阴清热的功效。类风湿关节炎(RA) 属于中医痹症范畴，现代临床和药理研究发现桂枝芍药知母汤用于治疗RA 有确切的疗效。RA的发病机制目前尚未清楚，但有研究表明在RA患者和模型动物血清和关节液中自由基水平升高，自由基在RA疾病的关节软骨损伤中起重要作用，桂枝芍药知母汤能有效清除自由基的作用。

目前对桂枝芍药知母汤的研究主要集中于其药效学研究，对其物质基础研究鲜有报道，如董运茁.HPLC同时测定桂枝芍药知母汤中7个有效成分的含量，也仅仅只能分析其中7种成分，且具有明显活性成分的肉桂酸还不能被检测出，不能有效反映出桂枝芍药知母汤的质量。现阶段公开的检测方法，也都不能使桂枝芍药知母汤的质量得到有效控制。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种桂枝芍药知母汤的检测方法，它是采用高效液相色谱法检测，其操作步骤如下：

1)参照物溶液的制备：取没食子酸、芒果苷、芍药苷、升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、肉桂酸和甘草酸铵对照品，分别加甲醇溶解，作为参照物溶液；

2)供试品溶液的制备：取待测样品，加甲醇溶液溶解，即得供试品溶液；

3)分别吸取参照物溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，色谱条件如下：

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以0.1％甲酸水为流动相A，以0.1％甲酸乙腈为流动相B梯度洗脱；梯度洗脱程序如下：

4)分析特征图谱。

进一步地，步骤2)所述待测样品为桂枝芍药知母汤或桂枝芍药知母汤冻干粉。

更进一步地，所述桂枝芍药知母汤冻干粉制备方法如下：

取桂枝芍药知母汤原方饮片，加水浸泡，煎煮，过滤，滤液冷却后定容，冷冻干燥，得桂枝芍药知母汤物质基准，取桂枝芍药知母汤物质基准加水溶解，再加乙醇溶液沉淀，取上清液真空冷冻干燥，制得桂枝芍药知母汤干粉。

更进一步地，所述饮片与水的质量体积比为93g：1400ml；所述浸泡 30min；所述煎煮是武火煮沸，文火微沸55min；所述过滤是用200目纱布双层过滤；所述定容至饮片的4.3倍量(v/w，ml/g)。

更进一步地，所述桂枝芍药知母汤物质基准与水的质量体积比为4g： 50ml；所述乙醇溶液为95-100％乙醇，优选95％乙醇；所述加乙醇溶液至溶液醇浓度为75％；所述沉淀时间为24-30h，优选24h。

进一步地，步骤2)所述甲醇溶液为50-100％甲醇，优选50％甲醇；所述待测样品与甲醇溶液的质量体积比为0.02-0.05g:1ml，优选0.02g:1ml。

进一步地，步骤3)所述注入液相色谱仪的溶液体积为10～20μl，优选 20μl。