[发明专利]一种基于微波处理提取细菌DNA的方法

说明书

本发明公开了一种基于微波处理提取细菌DNA的方法，它包括以下步骤：(1)取细菌菌液，离心，得菌体；(2)在步骤(1)的菌体中加入细胞裂解液，用输出功率为500～900W、微波频率900～2500MHz的微波炉加热60～90s，离心，得上清液，即为DNA提取物。本发明基于微波处理提取细菌DNA的方法，克服了传统样本DNA提取步骤多、复杂、费时等缺点，短时间内即可实现高通量快速提取细菌的DNA，在保证检测灵敏度的同时，具有高效、快速、低成本、操作简便等优势，具有较高的应用价值。

技术领域

本发明涉及一种基于微波处理提取细菌基因组的方法。

背景技术

细菌DNA的提取通常采用生物试剂和化学试剂相结合的方法。细菌DNA提取已经大规模的应用于细菌鉴定、分型、进化及流行病学分析等领域，是生物研究领域的一种常规的实验操作。现有的细菌DNA提取方法一般分为传统的化学抽提法和试剂盒法，化学抽提法耗时耗力，且需使用SDS、CTAB等化学试剂以及酚、氯仿等有机试剂，污染环境；试剂盒法一般使用商业试剂盒提取细菌DNA，大规模使用时，成本较高。

微波是指频率为300MHz～300GHz的电磁波，波长范围大约在1毫米到1米之间。近年来有研究者利用微波加热原理提取细菌DNA，该方法快速、简单，提取的DNA样本能用于常规PCR扩增，但是样本检出浓度较高，例如：金黄色葡萄球菌的最低检出浓度为10⁴CFU/mL，而单核细胞增生李斯特氏杆菌的最低检出浓度为10⁷CFU/mL(王琼等，一种采用微波炉加热快速提取细菌DNA用于PCR扩增的方法，西南民族大学学报，2015年第2期)。

发明内容

本发明克服现有技术的不足，本发明提供了一种基于微波处理提取细菌基因组的方法。

本发明提供的提取细菌DNA的方法，它包括以下步骤：

(1)取细菌菌液，离心，得菌体；

(2)在步骤(1)的菌体中加入细胞裂解液，用输出功率为500～900W、微波频率900～2500MHz的微波炉加热60～90s，离心，得上清液，即为DNA提取物。

其中，所述的细菌为铜绿假单胞菌、葡萄球菌、鲍氏不动杆菌、白色念珠菌或恶臭假单胞菌。

其中，所述的铜绿假单胞菌为铜绿假单胞菌标准株PAO1；所述的葡萄球菌为金黄色葡萄球菌ATCC 33591。

其中，步骤(1)中，所述菌液中，细菌数量为1×10⁸～1×10¹CFU/mL；

进一步地，所述菌液的制备方法为：

取细菌，培养至在培养基中的OD＝1，然后稀释至相应细菌数量。

其中，步骤(2)中，所述离心的条件为120000rpm/min下3min。

其中，步骤(2)所述的细胞裂解液由以下重量体积配比的原料组成：Chelex-100 1～10重量份、TritonX-100 1～5体积份、TE缓冲液50～150体积份。

Chelex-100是一种树脂，在DNA提取过程中一是充当金属离子化学螯合剂，二是抑制核酸酶的作用，防止DNA在微波加热中被降解，三是使蛋白质变性；

Triton X-100即聚乙二醇辛基苯基醚，是一种非离子型表面活性剂，又称去污剂，帮助蛋白质解散出DNA；

所述的重量份：g体积份：mL摩尔份为mmol/L。

其中，步骤(2)所述的细胞裂解液由以下重量体积配比的原料组成：Chelex-100 5重量份、TritonX-100 1体积份、TE缓冲液100体积份。