[发明专利]用于禽畜疫病防治的枯草芽胞杆菌复合液体菌剂的制备方法

说明书

本发明公开了一种用于禽畜疫病防治的枯草芽胞杆菌复合液体菌剂的制备方法及相关应用。制备步骤包括：A、制作复合菌群原料；B、制作一级液体菌种：（1）配置培养液；（2）将配置好的培养液装入三角瓶中，封口、灭菌后冷却至25℃以下，接入步骤A所得的母种菌丝块，每100ml培养液中接入1‑2块长宽各为2mm的母种菌丝块；同时添加步骤A所得枯草芽胞杆菌活化扩繁液10‑50ml；混匀菌种，然后培养1‑2.5天，得一级液体菌种；C、制作二级液体菌种，得到复合液体益生菌剂。本发明以高校研究课题成果为依据，所制备的复合菌液当中含有特定的益生菌群，通过在禽畜养殖场所喷洒所述复合液体益生菌剂，可进行禽畜疫病的防治。

技术领域

本发明涉及禽畜养殖技术领域，尤其是一种用于禽畜生态环境改善的复合菌液的制备和应用。

背景技术

目前，禽畜人工养殖行业中，禽畜饲养环境的改良处理是一个难题，禽蓄粪便及各种有害病菌的滋生也是导致禽畜疫病的重要来源。现有技术中，主要通过化学工业品进行定期消毒处理，效果不持久，且容易对禽畜本身造成伤害。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种用于禽畜疫病防治的枯草芽胞杆菌复合液体菌剂的制备方法及相关应用。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案如下。

用于禽畜疫病防治的枯草芽胞杆菌复合液体菌剂的制备方法，该方法包括如下制备步骤：

A、制作复合菌群原料：

（1）取枯草芽胞杆菌原液在碳源充足的温暖溶液中充分扩繁活化，备用；

（2）同时进行产朊假丝酵母的母种培养，将产朊假丝酵母菌丝块接入到PDA培养基上，25℃黑暗培养直至菌丝长满斜面，备用；

B、制作一级液体菌种：

（1）配置培养液；所述培养液包括如下重量份的组分：马铃薯18-20，红糖1-1.5，葡萄糖1.5-2，麦麸4-5，蛋白胨0.3-0.5，磷酸二氢钾0.01-0.03，硫酸镁0.1-0.2，清水78-80，pH值自然；再向培养液中加入维生素B1；

（2）将配置好的培养液装入三角瓶中，封口、灭菌后冷却至25℃以下，接入步骤A所得的母种菌丝块，每100ml培养液中接入1-2块长宽各为2mm的母种菌丝块；同时添加步骤A所得枯草芽胞杆菌活化扩繁液10-50ml；混匀菌种，然后培养1-2.5天，得一级液体菌种；

C、制作二级液体菌种：

（1）将9-11重量份的土豆加90-100重量份的水煮至酥而不烂后加入3.4-3.8重量份的大片麦麸，用6-8层纱布过滤后，向滤液中加入2.5-3重量份的辅料和0.025-0.03体积份的消泡剂，作为培养料；

（2）将350-370体积份的培养料注入培养罐内，124℃灭菌35分钟后，降温至30℃以下；将0.8-1.2体积份的一级液体菌种在无菌条件下接入到培养罐内；培养72-96小时，培养温度25℃，空气流量1.2m³/h以上；培养结束后得二级液体菌种，即为复合液体益生菌剂；

所述重量份的单位为g或kg，对应的体积份单位为mL或L。

作为本发明的一种优选技术方案，步骤A中，所述枯草芽胞杆菌经活化扩繁后的活菌数量不低于50亿UFC/mL。

作为本发明的一种优选技术方案，步骤B-（1）中，所述培养液包括如下重量份的组分：马铃薯20，红糖1.2-1.5，葡萄糖1.5，麦麸4-5，蛋白胨0.3，磷酸二氢钾0.02，硫酸镁0.1，清水70-75。

作为本发明的一种优选技术方案，步骤B-（1）中，维生素B1的含量为5mg/L。