[发明专利]抗缪勒激素胶乳增强比浊法检测试剂盒及其制备使用方法

说明书

本发明提供了一种抗缪勒激素胶乳增强比浊法检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，试剂R1：HEPES、KH₂PO₄、PEG6000、BSA等；试剂R2：HEPES、KH₂PO₄、PEG6000、交联山羊抗人AMH多克隆抗体的胶乳微球等。本发明还提供了一种抗缪勒激素胶乳增强比浊法检测试剂盒的制备、使用方法。本发明首次利用胶乳增强免疫透射比浊法来测定抗缪勒激素，可在全自动生化分析仪上使用，成本低廉、自动化高，能大大节省检测时间；并且，在高稳定性和高精密度情况下，相比ELISA产品具有更高的灵敏度，相比化学发光产品具有更好的特异性，大大提升了抗缪勒激素检测的临床应用价值。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域与免疫学测定分析领域，尤其涉及一种抗缪勒激素胶乳增强比浊法检测试剂盒及其制备使用方法。

背景技术

抗缪勒激素(Anti-Mullerhormone，AMH)是转化生长因子β(TGF-β)超家族成员，是性腺功能标志物之一，能诱导缪勒氏管退化，对性腺器官发育具有重要作用。男性AMH主要是睾丸未成熟的Sertoli细胞产生，形成于胚胎时期，并贯穿整个生命；女性AMH主要是卵巢窦前卵泡和小窦卵泡的颗粒细胞产生，其水平相对男性较低；当女性发育到达青春期后，AMH水平逐渐降低，至更年期是几乎检测不到。AMH是两个相同亚基经二硫键组成的二聚糖蛋白，临床主要应用于卵巢储备功能评价、ART预测、隐睾症、多囊卵巢综合征、卵巢颗粒细胞瘤、卵巢早熟、青春期性早熟。

早期建立的AMH检测方法是免疫细胞化学检测及放射免疫分析技术(Radioimmunoassay，RIA)，研究侧重于AMH在动物组织中的定位及功能研究，无法应用于临床检测诊断。为满足AMH检测的需求，Immunotech(IOT)与Diagnostic SystemsLaboratories(DsL)先后推出了两个独立的商品化ELISA检测试剂盒。第一代ELISA检测试剂盒使用的配对抗体及标准品都不一样，因此获得的检测结果差异较大。为了获得统一的AMH检测标准，Beckman-Coulter整合了这两个商品化ELISA检测试剂盒，建立了第二代ELISA检测技术。另外，AnshLabs在2012年及2013年分别推出了两个商品化的AMHELISA检测试剂盒，即超灵敏的AMH ELISA检测试剂盒及pico AMH ELISA检测试剂盒，本文依据其检测原理同样把它们列为第二代ELISA检测技术。2014年，罗氏诊断率先推出全自动AMH检测系统—Elecsys AMH检测系统，标志着AMH检测技术进入了全自动化阶段。后期Beckman-Coulter也推出了全自动的AMH检测—Access AMH检测系统。这两种AMH检测方法在临床应用上可以互相替换，具有较小的检测结果误差及较高的分析灵敏度，但与第二代ELISA检测结果相比均偏低。国内AMH商品化检测系统发展较为落后，基本被国外顶级体外诊断试剂厂家所垄断。并且，AMH检测系统仅在少数三甲医院配备，普及率极低，需要特定的仪器设备，检测价格昂贵，严重制约了国内AMH检测的推广。

胶乳増强免疫比独法是20世纪70年代出现的能够动态测定抗原抗体结合的检测方法。在特定的稀释系统中，抗原抗体发生结合，并且在结合比例合适时，会形成微粒从液相析出，在抗原和抗体结合的前后，会发生浊度的变化，最后通过全自动生化分析仪检测这种浊度变化，利用标准品绘制线性曲线，从而得出样品中待测物质的含量。免疫透射比浊法不需要特殊的仪器，操作上简单便捷。此外，胶乳增强免疫比浊法能够利用胶乳载体增强反应的吸光度，使检测的敏感性大大提高，通过全自动生化分析仪进行检测实现了检测的自动化，更加方便、快捷、节省时间，能够满足临床大样本检测的需求。

因此，针对现有自动化检测试剂盒特异度低、检测成本高的问题，目前急需一种基于多克隆抗体交联底物的抗缪勒激素胶乳增强比浊检测试剂盒，使其保持灵敏度的同时，能进一步地提高检测的特异度，进一步地降低检测成本。

发明内容