[发明专利]分泌沙丁胺醇单克隆抗体的杂交瘤细胞株、单克隆抗体及应用

说明书

本发明公开了一种可以特异性结合沙丁胺醇的高亲和力单克隆抗体及其可变区氨基酸序列。本发明还提供了一株可以产生上述单克隆抗体的杂交瘤细胞系(沙丁S‑846‑10)。本发明所述抗体具有特异性识别并结合沙丁胺醇抗原的能力，可用于沙丁胺醇的检测。

技术领域

本发明涉及一株特异性结合沙丁胺醇的高亲和力单克隆抗体及其可变区氨基酸序列，以及分泌该抗体的细胞株和应用。

背景技术

沙丁胺醇(salbutamol)是一种短效β2肾上腺素受体激动剂，用作平喘药，能有效地抑制组胺等致过敏性物质的释放，防止支气管痉挛。适用于支气管哮喘、喘息性支气管炎、支气管痉挛、肺气肿等症。添加微量沙丁胺醇于牲畜饲料内，可以增加牲畜的瘦肉量及换肉率、减少脂肪，但是其毒性远高于具有相同功能的莱克多巴胺。

近年来，我国发现或查处的沙丁胺醇违法添加案件仍时有发生，严重影响了我国畜牧业发展，破坏了行业信誉，并对人民群众身体健康造成了潜在危害。随着国家对食品安全日益重视，不断加大违法违规行为打击力度，沙丁胺醇违法添加行为已大有收敛，整治效果显著。

目前，国家及行业标准规定的沙丁胺醇权威检测方法为液相色谱-质谱技术。此方法灵敏度高、特异性强，可靠性好；但是依赖大型仪器，操作繁琐费时，成本较高，不能广泛推广使用。另外，基于抗原-抗体特异性结合的免疫学分析技术也可以被用于沙丁胺醇的检测，该方法灵敏度、特异性较好，不依赖于大型仪器，操作方便、时间短、成本低，是一种易于现场即时使用的检测技术。目前市场上有基于免疫层析等方法的多种沙丁胺醇检测试剂或试纸卡片在售。

基于免疫反应的检测方法核心是特异性识别沙丁胺醇的单克隆抗体，该抗体的结合灵敏度和特异性决定了检测试剂盒的质量，因此好的抗沙丁胺醇单克隆抗体的研制是该类检测试剂盒开发的关键前提。

发明内容

本发明提供了一株可以分泌特异性识别并高亲和力结合沙丁胺醇的单克隆抗体的细胞株。命名为杂交瘤细胞株沙丁S-846-10。该细胞株于2018年7月17日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏单位地址为中国·武汉·武汉大学，保藏号为CCTCC NO：C2018154。

本发明还提供了上述细胞株分泌的可以特异性识别并高亲和力结合沙丁胺醇的单克隆抗体。

所述的单克隆抗体的可变区氨基酸序列包括如SEQ ID NO.1所示的重链和SEQ IDNO.2所示的轻链：

SEQ ID NO.1：

EVQLQQSGPGLVKPSQSLSLTCTVTGNSITSDHAWNWIRQFPGNKLEWMGNINYSGRTSYNPSLKSRLSITRDTSKNQFFLQLNSVTNEDTATYFCTVDDWYFEVWGAGTTVTVSS

SEQ ID NO.2：

NIMMTQSPSSLAVSAGEKVTMRCQSSQSLLYSSNQKNFLAWYQQKPGQSPELLIYWASTRASDVPDRFTGSGSGTDFNLTISSVQAADLAVYYCLQYLSSRTFGGGTKLELK

本发明还提供了上述细胞株或抗体在制备沙丁胺醇检测试剂盒中的应用，进行沙丁胺醇含量测定。

相比于现有技术，本发明的有益效果在于：首次获得高效结合沙丁胺醇抗原的单克隆抗体可变区基因序列，为后续抗体试剂应用于检测试剂盒时采用规模化表达生产提供了序列基础。

附图说明

图1抗沙丁胺醇ELISA效价检测。

图2可变区cDNA的5’race PCR结果，红色箭头表示目的片段。M：分子量标记；1：轻链可变区；2：重链可变区。

具体实施方式