[发明专利]一种狂犬病毒抗体定量检测试剂盒及其制备方法与检测方法

说明书

本发明公开了一种狂犬病毒抗体定量检测试剂盒及其制备方法与检测方法，属于抗体检测试剂盒技术领域，解决现有技术抗体检测准确度不够高，存在安全隐患的问题。本发明的试剂盒包括免疫层析检测试纸条和样品稀释液，免疫层析检测试纸条由一端至另一端依次包括：包被狂犬病毒抗原的样品垫、包被抗狂犬病毒抗原的单克隆抗体的标记垫、包被检测线和质控线的硝酸纤维素膜、以及吸水垫，其彼此相互重叠并贴于背板的上表面。本发明采用竞争法检测血中狂犬病毒抗体，同时配合读条设备，根据标准曲线可直接显示出血样中的真实抗体数值，提高检测的准确性和灵敏度。

技术领域

本发明涉及抗体检测试剂盒技术领域，尤其涉及一种狂犬病毒抗体定量检测试剂盒及其制备方法与检测方法。

背景技术

狂犬病俗称“疯狗病”，是迄今为止人类唯一病死率为100％的急性传染病。狂犬病在世界范围内广泛分布。据报道全世界每年估计因狂犬病导致的死亡人数为4万～7万，近年来，我国狂犬病疫情一直呈上升趋势，病死数居我国37种法定报告传染病首位。1996年全国报告狂犬病发病数曾一度较低，为159例，而2004年全国狂犬病报告发病数上升至2660例，2010年中国官方发布的经有效性确诊的狂犬病发病人数为3300人。许多种类的哺乳动物都与狂犬病的传播有关，犬是发展中国家人狂犬病最主要的储存宿主和传播宿主。人感染狂犬病最常见的方式是通过感染狂犬病毒的犬、猫、野生食肉动物以及食虫和吸血蝙蝠的咬伤、挠抓、舔舐皮肤或粘膜破损处而感染。

狂犬病疫苗是控制人和动物狂犬病的关键因素。世界卫生组织(WHO)狂犬病专家委员会认为，血清中的有效结合狂犬病毒的中和抗体效价≥0.5国际单位(IU/ml)才具有足够的保护性，如果中和抗体效价0.5IU/ml，必须给予多个剂量的加强免疫，直到抗体达到要求为止。狂犬病毒G蛋白是唯一诱导机体产生病毒中和抗体的蛋白，因此，利用狂犬病毒G蛋白来检测血清中的中和抗体效价是最科学和直接的方法。

根据CFDA医疗器械注册查询结果可知，目前人狂犬病毒抗体(IgG)检测试剂盒已批准的产品有两个，适用范围均为定性检测人血清中狂犬病毒IgG抗体；兽用狂犬病毒抗体检测试剂盒目前尚无获批产品。因此，现有的狂犬病毒抗体检测产品仅用于定性检测，可见目前定量检测的试剂盒存在一定技术难度和技术壁垒。然而，抗体的定性检测存在很大弊端，检测结果不够准确，即使检测结果显示阳性，血清中的中和抗体也未必达到≥0.5国际单位(IU/ml)效价，不具足够的保护性，增大了感染狂犬病的风险，存在很大安全隐患。

发明内容

本发明针对上述技术问题，提供一种狂犬病毒抗体定量检测试剂盒及其制备方法与检测方法。该试剂盒可以在机体接受狂犬疫苗接种后，通过对全血或血清的检测，配套检测设备，通过分析检测线显色强度利用回归方程，进行数字化表示抗体效价，能快速准确的检测血液中狂犬抗体水平具体数值，明确是否抗体水平达到0.5IU水平，从而对狂犬疫苗免疫水平进行监测，提示免疫效果，真正评价狂犬疫苗的免疫达到免疫保护，保障犬和人类的安全，具有十分良好的应用前景。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种狂犬病毒抗体定量检测试剂盒，包括免疫层析检测试纸条和样品稀释液；

所述免疫层析检测试纸条由一端至另一端依次包括：包被狂犬病毒抗原的样品垫、包被抗狂犬病毒抗原的单克隆抗体的标记垫、包被检测线和质控线的硝酸纤维素膜、以及吸水垫，其彼此相互重叠并贴于背板的上表面；

其中，样品垫包被的狂犬病毒抗原为狂犬病毒样颗粒，检测线包被有抗狂犬病毒抗原的单克隆抗体，质控线包被有金黄色葡萄球菌A蛋白，标记垫包被的抗狂犬病毒抗原的单克隆抗体由胶体金或荧光微球标记；

所述样品稀释液为含有15mmol/L硼砂，0.5％NaCl，0.2％Tween-20，0.1％NaN₃，pH值为8.4的溶液。

所述样品垫包被的狂犬病毒抗原的蛋白浓度为0.5-2.0g/L。