[发明专利]基于血糖仪的DNA凝胶检测miRNA-21的方法

说明书

本发明公开了一种基于血糖仪的DNA凝胶检测miRNA‑21的方法，具体按照以下步骤进行：步骤S1、DNA聚合链PS‑Ⅰ和DNA聚合链PS‑Ⅱ的合成；步骤S2、用步骤S1制备DNA聚合链PS‑Ⅰ和DNA聚合链PS‑Ⅱ进行封装淀粉酶的DNA凝胶的制备；步骤S3、用血糖仪对miRNA‑21进行测定。本发明解决了易于操作的血糖仪能够可实时测定miRNA‑21含量的问题，实现了公众对于待测物miRNA‑21的检测需求。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，特别是涉及一种基于血糖仪的DNA凝胶检测miRNA-21的方法。

背景技术

microRNA(miRNA)是一种具有20-24个碱基的内源性小RNA，这种小RNA在早期发育、细胞增殖、凋亡和死亡等生命过程中起着重要的调节功能。近期，研究表明，miRNA的表达水平与肿瘤的发生、扩散和术后恢复密切相关，因此，它可以作为相应癌症的理想潜在生物标志物。特别地，miRNA不仅在癌细胞和肿瘤组织中表达，同样在外周血中表达。而且，miRNA在外周血中的表达水平与在癌细胞和肿瘤组织中的表达水平具有明显相关性。另外，外周血检测具有非入侵性等优点，因此，实现miRNA在外周血中的识别与定量，对于癌症的早期诊断、治疗以及术后评估是非常重要的。

miRNA的灵敏检测一直受到其具有较少的碱基个数、相似的核酸序列以及低含量等特征的限制。虽然像RNA印记法、微阵列分析、逆转录聚合酶链反应、流式细胞术以及酶催化放大技术等方法已经应用到医学中心和研究型实验室，但是这些方法仍然受到一些限制，例如需要大型的仪器设备，精确的温度控制，需要较长的检测时间，另外还需要专业人员进行操作。目前为止，很少有检测技术让公众可以在非特定场所对miRNA进行检测。相反，公众需要耗费大量的时间和金钱将样品送到专业机构进行检测，这不仅延后了癌症的早期诊断，而且使得癌症的术后恢复不能得有效的监控。因此，急需一种公众可直接使用的简单、快速、灵敏的miRNA检测方法。

miRNA-21作为miRNA检测中较为重要的部分，经常被用于测量，但是识别miRNA-21现有的方法都较为复杂。

在过去的许多年里，血糖仪是实现病人自检测的最成功例子。血糖仪具有小尺寸、易操作、价格低、检测结果可靠等优点，但是，传统血糖仪仅可用来监测葡萄糖的含量，这极大的限制了其广泛应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于血糖仪的DNA凝胶检测miRNA-21的方法，解决了现有技术中存在的公众需要耗费大量的时间和金钱将样品送到专业机构进行检测以及血糖仪仅能检测葡萄糖含量的问题。

本发明所采用的技术方案是，基于血糖仪的DNA凝胶检测miRNA-21的方法，具体按照以下步骤进行：

步骤S1、DNA聚合链PS-Ⅰ和DNA聚合链PS-Ⅱ的合成；

步骤S2、用步骤S1制备DNA聚合链PS-Ⅰ和DNA聚合链PS-Ⅱ进行封装淀粉酶的DNA凝胶的制备；

步骤S3、用血糖仪对miRNA-21进行测定。

进一步的，所述步骤S1将质量分数为25％的丙烯酰胺水溶液与缓冲溶液混合，然后加入到3mM的丙烯酰胺标记的Strands-Ⅰ水溶液中，将混合溶液在真空干燥器中脱气10min，加入质量分数为5％的过硫酸铵水溶液和质量分数为5％的N,N,N',N'-四甲基乙二胺水溶液，继续脱气18min，得到DNA聚合链PS-Ⅰ，并置于4℃保存；

Strands-Ⅰ的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

将质量分数为25％的丙烯酰胺水溶液与缓冲溶液混合，然后加入到3mM的丙烯酰胺标记的Strands-Ⅱ水溶液中，将混合溶液在真空干燥器中脱气10min，加入质量分数为5％的过硫酸铵水溶液、质量分数为5％的N,N,N',N'-四甲基乙二胺水溶液，继续脱气18min，得到DNA聚合链PS-Ⅱ，并置于4℃保存；