[发明专利]一种基于SPR快速筛选单克隆抗体的方法

说明书

本发明公开了一种基于SPR快速筛选单克隆抗体的方法及其所筛选的PD‑1单克隆抗体。本发明的单克隆抗体筛选方法，能够同时筛选上百种抗体，并同时比较抗体与抗原的亲和力，选出亲和力最大的抗体株，该方法解决了传统的ELISA检测方法存在的技术缺陷，使其满足快速高通量筛选高亲和力抗体的要求，并能减少抗体毒副作用、延长半衰期、降低免疫源性，对单克隆抗体作为药物进入临床治疗研究具有重要的现实意义。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种基于SPR快速筛选单克隆抗体的方法。

背景技术

目前，单克隆抗体筛选过程中，通常使用酶联免疫吸附法(Enzyme LinkedImmunosorbent Assay，ELISA)，费时费力，灵敏度低，难以满足大量抗体的快速筛选以及筛选特异性高、亲和力高的抗体。

表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance，SPR)技术是一种分析生物分子间相互作用的生物传感分析技术，目前常用的是生物大分子相互作用分析系统(Biomolecular Interaction Assay，BIA)。表面等离子体共振是基于物理光学现象的一种分析技术。当偏振光以共振角入射照在金属和电介质的界面上时，发生全反射，入射光的一部分能量与表面等离子体波发生耦合，引起表面等离子体共振，产生光强急剧减少的反射光。利用光学SPR技术测定时，一般是将一种功能反应物(如配体)固定在传感芯片表面金属膜上，当加入待测样品(受体)并使其与传感芯片上的功能反应物相互作用时，引起体系的折射率变化，从而引起SPR光学信号的改变。通过分析传感图谱及分子相互作用的响应值获取分子相互作用的模式和动力学常数等方面的信息，并且获得的信息是能够定性和定量。

自1990年第一台商业化SPR检测仪问世以来，基于SPR原理的传感器及其应用研究有了快速发展。与传统的单克隆抗体筛选法-ELISA相比，它具有高灵敏度、响应快、体积小、机械强度大、检测过程快捷、能够获得实时数据、操作方便、无需标记、可保持分子的生物活性、既可定性也可定量、可再生重复利用、抗电磁干扰能力强和光纤相连可实现数据的远程采集和连续在线监控等突出优点。而SPR生物传感技术恰恰由于它的实时、连续分析，使之在生物分子反应的亲和力和动力学分析上具有极大的优越性。SPR传感技术现已被广泛应用于生命科学研究、药物筛选、食品分析、环境监测、农业生产等领域。SPR技术现在已广泛应用于生物、化学、免疫学研究及新药开发等领域。

目前筛选的抗体在机体易产生严重的特异性体液免疫反应，导致其被快速清除，静脉注射后血药浓度很快降低，限制了其治疗效果。现如今制备基因工程抗体，但对抗体的基因工程改造，不可避免的导致抗体与抗原结合能力的大幅度降低，且容易带来细胞毒性。

因此，研发出一种基于SPR生物传感技术应用于单克隆抗体筛选过程中，解决传统的ELISA检测方法存在的技术缺陷，使其满足快速高通量筛选高亲和力抗体的要求，并能减少抗体毒副作用、延长半衰期、降低免疫源性，对单克隆抗体作为药物进入临床治疗研究具有重要的现实意义。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的主要目的在于提供一种基于SPR快速筛选单克隆抗体的方法及其所筛选的鼠源PD-1单克隆抗体(即抗体21)。

本发明一个方面提供一种基于SPR快速筛选单克隆抗体的方法，其包括以下步骤：

1)清洗镀金芯片表面；

2)清洗后的芯片用PEG2000溶液进行表面修饰，得到修饰后的芯片；

3)修饰后的芯片用pH4.75的0.01-1mg/mL单克隆抗体样本及阴性对照抗体蛋白的10mM醋酸钠缓冲液进行包被，得到包被后的芯片；

4)通过使目标抗原溶液流经所述包被后的芯片，从而目标抗原与所述芯片上的单克隆抗体发生免疫反应，进行SPR检测筛选得到高亲和力的目标单克隆抗体。