[发明专利]脂肪酸结合蛋白4的小干扰RNA及其应用

说明书

本发明提供了脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在用于诊断和/或愈后评估结核病试剂盒中的用途，以及所述脂肪酸结合蛋白4(FABP4)的小干扰RNA在制备用于预防或治疗结核病的药物中的用途。本发明所述的FABP4在BCG感染的巨噬细胞RAW264.7细胞中高表达，且FABP4的小干扰RNA能够抑制巨噬细胞发生凋亡的功能，因此FABP4的小干扰RNA可以作为新型的药物作用靶点，对结核病的预防及治疗具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及生物技术医药领域，尤其是涉及一段抑制人或哺乳动物FABP4蛋白表达水平的RNA干扰序列以及以此核心序列为基础的针对FABP4的靶向干扰技术，具体涉及抑制FABP4蛋白表达水平的RNA干扰序列及其应用。

背景技术

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是由细胞内双链小干扰RNA(smallinterference RNA，siRNA)引导的，通过细胞内RNA干扰原理识别具有同源序列的靶点mRNA后引起mRNA的降解或翻译抑制，从而抑制或降低mRNA编码蛋白表达水平的现象，其核心是一段21个核苷酸左右长度的具有靶向性的特异核酸序列，下面统称为核心序列。RNAi是广泛存在于大多数真核生物中，发生于转录后阶段的基因沉默现象。

近年来，人们利用这一原理针对靶基因表达进行阻断，从而产生相应的功能缺失表型用于科学研究，或疾病治疗，形成RNAi技术。根据RNAi原理，既可以在体外直接合成以核心序列为基础的RNA双链(siRNA)转入细胞，也可以利用不同的DNA表达载体携带核心序列在体内表达形成短发夹状RNA(shRNA)，起到特异性识别与降解相应的靶基因mRNA，或封闭其翻译的效果。虽然RNAi技术提供了一种对任何基因进行靶向干预调控的手段，在生物医学基础研究和疾病治疗领域具有重要的应用价值和前景，但其前提是必需针对靶基因对象展开分析、预测和实验筛选，找到一段特异和有效的核心序列，然后以此核心序列为基础，通过如上所述的通用方法实施对靶基因在蛋白水平的表达干扰。

结核病(Tuberculosis,TB)是由结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis，Mtb)感染所引起的可空气传播的严重传染性疾病。根据世界卫生组织在2018年全球结核病报告，2017年全球新增结合病例640万人，其中157万人死亡，死亡率接近25％，同时多重耐药、共患病等因素已显著的增强了结核病的危险性，人类健康正在面临巨大的挑战。巨噬细胞是结核分支杆菌的主要宿主细胞也是人体的重要免疫细胞之一，当结核分支杆菌入侵时，巨噬细胞会主动吞噬病菌并在内部与其发生复杂的相互作用。在这一过程中，巨噬细胞会通过编程性死亡，控制病原体在人体内的扩散。细胞凋亡作为重要的清除病原菌的手段，也是细胞程序性死亡的重要部分，通过“自杀”的方式将细胞自身与细菌完全清除，是细胞抵御外来感染，控制感染源扩散的重要方式。与此同时，作为胞内寄生菌，结核分支杆菌会分泌多种毒性因子，通过影响细胞凋亡的进程以达到免疫逃逸的目的。这一博弈过程繁复，至今尚未完全明晰。

近期研究发现，在感染性疾病中，为满足巨噬细胞免疫功能执行过程中大量的物质与能量需求，巨噬细胞内部代谢通路会发生相应变化。相应的，代谢通路中的调控因子和代谢产物也会对免疫功能的执行产生影响。

脂肪酸作为细胞的重要组成部分，其含量变化会影响细胞的代谢状态与免疫功能的执行。首先，当巨噬细胞极化成M2型时，需要大量的能量供应，脂肪酸作为基础的供能分子，在脂肪酸氧化过程中产生的乙酰辅酶A、NADH和FADH2，可以通过TCA循环为细胞提供大量能量。其次，脂肪酸作为重要的信号分子，可作为多种粒子通道和激酶的配体，对免疫细胞的免疫反应进行调节。