[发明专利]一种同时评价桃金娘根中抗氧化活性成分和含量的方法

说明书

本发明涉及一种利用DPPH‑UPLC对桃金娘根中有效成分没食子酸和鞣花酸的抗氧化性及其含量同时进行评价的方法，包括以下步骤：将与DPPH反应前和反应后的待测样品分别进行超高效液相色谱仪检测；根据UPLC检测得到的DPPH反应前和DPPH反应后供试品溶液的没食子酸和鞣花酸峰面积，计算没食子酸和鞣花酸含量及清除率。本发明能够同时检测桃金娘根中有效物质的抗氧化性及其含量；且操作简便、快速、试剂消耗少、灵敏度高，可用于评价桃金娘根药材中抗氧化活性成分及其含量，为桃金娘抗氧化活性成分的筛选和进一步开发提供理论依据。

技术领域

本发明涉及中药材抗氧化活性成分分析领域，具体为一种利用DPPH-UPLC对桃金娘根中有效成分没食子酸和鞣花酸的抗氧化性及其含量同时进行评价的方法。

背景技术

桃金娘根中的主要有效成分为没食子酸和鞣花酸，而没食子酸和鞣花酸已被证实具有抗氧化功效，因此，评价桃金娘根药材中抗氧化活性成分及其含量，能够为桃金娘抗氧化活性成分的筛选和进一步开发提供理论依据。

目前，评价中药材中有效成分抗氧化性的方法主要为UV法、HPLC-UV-DPPH法、HPLC-DPPH-UV-MS法等。UV法繁琐，试剂消耗大，耗时长，重现性差；HPLC-UV-DPPH法耗时长；HPLC-DPPH-UV-MS法仪器价格昂贵，对操作人员要求高，普及率不高。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，利用超高效液相色谱(UPLC)具有超高速度、灵敏度、分离度等优点，以及DPPH与自由基反应后吸收减弱的原理，基于UPLC建立一种快速、简便的同时评价桃金娘根药材中抗氧化活性成分和含量的方法。

本发明解决上述技术问题所采取的技术方案是：一种利用DPPH-UPLC同时对桃金娘根中有效成分没食子酸和鞣花酸的抗氧化性及其含量进行评价的方法，包括以下步骤：

(1)桃金娘根鉴定；

(2)标准溶液的制备：分别精密称取没食子酸对照品和鞣花酸对照品置于50mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成含没食子酸50～500μg/mL和鞣花酸50～500μg/mL的混合对照品溶液；临用时，分别用甲醇依次稀释上述标准溶液，配制成不同浓度的标准工作液；

(3)供试品溶液的制备：将干燥桃金娘根打粉，过筛，得到待检测的桃金娘根药材样品粉末，置干燥器中储存；准确称取0.1～1.0g桃金娘根粉末置于100mL具塞锥形瓶中，精密加入10～150mL甲醇，称定重量，在50～1500W，25～100kHz，25～60℃条件下超声提取10～90min，放冷，过滤，挥干，甲醇溶解残渣，并定容至25mL容量瓶中。分别精密吸取5mL上述溶液置10mL棕色容量瓶内，分别加入甲醇和5.04mmol/L的DPPH溶液定容至刻度，摇匀，室温下避光反应10～60min，得到DPPH反应前和DPPH反应后供试品溶液，所有供试品溶液过0.2μm滤膜后再进行测定。

(4)超高效液相色谱检测，色谱条件如下：

色谱柱：2.1mm×100mm、1.6μm WatersT3色谱柱；流动相：乙腈-0.2％磷酸；梯度洗脱条件：6％乙腈0～2min，6％～16％乙腈2～3min，16％～20％乙腈3～8min，6％乙腈8～10min；检测波长：240～350nm；流速：0.1～0.5mL/min；柱温：25～50℃；进样体积0.5～10μL。

(5)成分含量及其抗氧化作用评价：记录UPLC测定得到的DPPH反应前和DPPH反应后供试品溶液的没食子酸和鞣花酸峰面积，依据下式计算清除率：清除率＝1-A/A₀，其中A₀为DPPH反应前化合物峰面积，A为DPPH反应后化合物峰面积，评价桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的含量和抗氧化能力。

本发明利用DPPH-UPLC对桃金娘根中有效成分没食子酸和鞣花酸的抗氧化性及其含量同时进行评价的方法，与现有技术相比具有以下优点和积极效果：