[发明专利]基于膜结合复合物的生物体鉴别方法

说明书

基于膜结合复合物的生物体鉴别方法，所述膜结合复合物至少由两部分组成，分别为穿膜蛋白和信号分子，所述穿膜蛋白和信号分子通过化学键或者柔性氨基酸片段连接。本发明提供了一种快速、简便、有效的生物体鉴别的方法，只需要将生物体和蛋白混合孵育10分钟即可，不同的生物体荧光强度从几千到几百万不等，不同种生物体之间分辨率大，方法重复性和准确率非常高。

技术领域

本发明属于细胞鉴别技术领域，具体涉及一种基于膜结合复合物的生物体鉴别方法。

背景技术

临床细菌鉴别是临床感染治疗中的常用技术，目前临床上以生化鉴别为主，一个正常的鉴定程序需要进行细菌分离、初步鉴定、生化鉴定和血清学鉴定四个步骤，每个步骤都相对繁琐，费时费力，以bio Merieux的VITEK鉴别系统为例，生化鉴定就包括63个生化反应。近年来，分子生物学技术、质谱技术、光谱技术、微流控技术、芯片技术在细菌鉴别的领域多有报道，但是这些技术都受到仪器昂贵、维护成本高、技术要求高、无法批量操作等因素的限制，至今无法得以大规模应用。目前生化鉴别方法的最好替代应该是一种价格低廉，操作简单，可大批量进行的鉴定方案。穿膜蛋白如抗菌肽就可以通过插入到细菌膜中抑制细菌的生长，且抗菌肽对各种细菌均具有恒定的最低抑菌浓度MIC。研究发现抗菌肽在特定浓度下与脂分子膜的结合比例是相对固定的。

标准细胞株在科研院校和各大药企大规模用于疾病和药物的研究。近年来，细胞株的退化变异甚至污染问题日渐突出。一般的实验室鉴定方法包括镜检和基因测序，耗时较多。一些抗肿瘤肽可以以恒定比例通过插入细胞膜抑制细胞的生长。

靶向治疗起步于上个世纪，随着脂质体技术的发展，靶向脂质体一度非常热门，但是直到今天也没有一个成熟的靶向脂质体进入市场。用于靶向治疗的分子大多为蛋白物质，如肿瘤特异性配体，抗体等。目前的在脂质体上修饰蛋白的方式以化学方法为主，通过EDC/NHS将蛋白修饰到功能化的脂分子上，但是这种化学方法易造成化学残余，反应难以控制，步骤复杂，工艺难以放大，故在制药领域很少应用。本发明将提供一种相对简单，过程温和，费时较少的非化学反应的新方法用于蛋白修饰脂质体的制备。

发明内容

解决的技术问题：本发明提供一种基于膜结合复合物的生物体鉴别方法，将穿膜蛋白和信号分子有效结合起来，通过化学合成或者生物工程表达的方式进行生产，并应用于临床、科研和制药领域。

技术方案：膜结合复合物在生物体鉴别中的应用，所述膜结合复合物至少由两部分组成，分别为穿膜蛋白和信号分子，所述穿膜蛋白和信号分子通过化学键或者柔性氨基酸片段连接。

上述生物体为细菌或细胞。

上述穿膜蛋白包括自然界和人工设计的抗菌肽或抗肿瘤肽。

优选的，上述穿膜蛋白包括Ib-AMP1、Ib-AMP2、Ib-AMP3、Ib-AMP4、Thanatin、S-thanatin及其4个氨基酸以内的突变体。

上述信号分子为化学合成的荧光分子、荧光蛋白、肿瘤特异性蛋白配体或肿瘤特异性适配体。

优选的，上述荧光分子为FITC或FAM。

优选的，上述荧光蛋白为GFP、YFP、RFP或BFP。

优选的，上述肿瘤特异性蛋白配体为RGD肽或特异性肿瘤抗原抗体。

优选的，上述肿瘤特异性适配体为DNA、RNA或多糖。

优选的，上述信号分子为辣根过氧化氢和NAD(P)/NAD(P)H氧化-还原酶。