[发明专利]一种基于检测波长切换的蒲地蓝消炎片HPLC指纹图谱的构建方法

权利要求书

1.一种基于检测波长切换的蒲地蓝消炎片HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，吸取蒲地蓝消炎片供试品溶液注入液相色谱仪进行高效液相色谱分析，经多点校正和全谱峰匹配，采用平均数法生成蒲地蓝消炎片对照指纹图谱；结合对照指纹图谱和对照品的紫外光谱图，在对照指纹图谱中指认了其中7个共有峰对应的成分：保留时间为2.713min、23.246min、28.072min、28.647min、30.668min、34.288min、35.391min的峰分别是单咖啡酰酒石酸、黄芩苷、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A；

所述高效液相色谱的色谱条件如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的AgilentPoroshell 120 SB-C18为色谱柱，所述色谱柱的规格为2.1 mm×50mm，2.7μm；检测波长为0～10min 323nm，10～40min 280nm；以甲醇为流动相A、乙腈为流动相B、0.1%磷酸溶液为流动相C，进行梯度洗脱，洗脱程序如下：

0-5min，流动相A 10￫20%、流动相B 5%、流动相C 85￫75%；

5-20min，流动相A 20￫25%、流动相B 5￫10%、流动相C 75￫65%；

20-30min，流动相A 25￫40%、流动相B 10￫15%、流动相C 65￫45%；

30-40min，流动相A 40%、流动相B 15%、流动相C 45%。

2.根据权利要求1所述的一种基于检测波长切换的蒲地蓝消炎片HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：

（1）供试品溶液的制备：取蒲地蓝消炎片，除去包衣，研细，置具塞锥形瓶中，加入提取溶剂，密塞，称定重量，加热回流，取出，放冷，再称定重量，用提取溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（2）对照品溶液的制备：取单咖啡酰酒石酸、黄芩苷、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A对照品，用甲醇制成混合对照品溶液；

（3）HPLC测定：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各2μL，注入高效液相色谱仪，记录对照品和样品色谱图，测得的色谱图即为样品指纹图谱；

（4）蒲地蓝消炎片对照指纹图谱的建立：取若干家不同企业的蒲地蓝消炎片各1批，分别按步骤（1）供试品制备方法制得供试品溶液，进样，测得该样品的指纹图谱，导入国家药典委员会“中药色谱指纹图谱评价系统”2012.130723版软件，经多点校正和全谱峰匹配，采用平均数法生成蒲地蓝消炎片对照指纹图谱；

（5）样品指纹图谱相似度评价：测定各样品的指纹图谱，以对照指纹图谱为参比，采用步骤（4）的评价软件，对样品进行相似度评价。

3.根据权利要求1或2所述的一种基于检测波长切换的蒲地蓝消炎片HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，高效液相色谱法的色谱条件：流速：0.3ml/min；柱温：30℃。

4.根据权利要求1或2所述的一种基于检测波长切换的蒲地蓝消炎片HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，波长切换时间选为黄芩苷峰保留时间前10分钟。

5.根据权利要求2所述的一种基于检测波长切换的蒲地蓝消炎片HPLC指纹图谱的构建方法其特征在于，步骤（1）中加热回流方法能有效抑制酶的活性，在85℃回流温度下，黄芩酶全部灭活，加热回流时间为2h。

6.根据权利要求2所述的一种基于检测波长切换的蒲地蓝消炎片HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤（1）中供试品提取溶剂为50%甲醇。

7.根据权利要求2所述的一种基于检测波长切换的蒲地蓝消炎片HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤（5）样品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度应大于0.95。