[发明专利]一种无血清细胞培养基及其应用

说明书

本发明涉及细胞培养技术领域，具体公开一种无血清细胞培养基及其应用，培养基中各组分含量为：碳水化合物、氨基酸、核苷酸、维生素、无机盐、添加物和去离子水。本发明的无血清细胞培养基组分明确、配方成本低，细胞增殖速度快、活性高，得到的细胞产物产量和纯度高，可完全替代传统含血清的细胞培养基。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种无血清细胞培养基及其应用。

背景技术

细胞培养技术已经经历了几十年的发展，其广泛应用于生物、医疗和药品等技术领域，具有较高的应用价值，且随着产品分类越来越细化，对细胞培养基的分类和要求也越来越精细，其中通过细胞培养来获得蛋白药物和抗体已经成为医药行业发展的重要方向，而细胞培养基的选择不仅影响细胞的生长和增殖速度，还影响着细胞产物的合成和分离。目前细胞培养用的培养基都普遍添加有动物血清，而动物血清中的成分复杂并且含有外源IgG，导致目标产物分离纯化困难，对产物的品质产生影响，且增加目标产物的生产成本。

发明内容

针对现有细胞培养基细胞增殖速度慢、目标产物合成效率低以及因添加动物血清影响目标产物品质等问题，本发明提供一种无血清细胞培养基及其应用。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种无血清细胞培养基，培养基中各组分含量为：2000-5500mg/L的碳水化合物、300-4800mg/L的氨基酸、0.1-55mg/L的核苷酸、8-150mg/L维生素、1060-23000mg/L无机盐、2100-11200mg/L添加物和去离子水；

所述添加物包括酚红、N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸、重组胰岛素、转铁蛋白、牛血清白蛋白、亚硒酸钠和乙醇胺。

相对于现有技术，本发明提供的无血清细胞培养基组分明确、配方成本低，细胞培养过程中，细胞体外增殖速度快、活性高，得到的细胞产物产量和纯度高，可完全替代传统含血清的细胞培养基，同时又避免了因血清的加入而导致得到的细胞产物无法分离进而影响产物品质及增加产物的分离成本。

添加剂中重组胰岛素、转铁蛋白和乙醇胺结合配合添加物中的N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸和亚硒酸钠可代替培养基中血清提供的营养物质，其细胞培养中的细胞增殖效果和产物合成效率甚至优于血清的加入。

优选地，所述碳水化合物中包含的组分及各组分在培养基中的含量为：D-葡萄糖2000-5000mg/L、丙酮酸钠5-300mg/L、亚油酸0.01-20mg/L。

D-葡萄糖作为主要的碳源，配合加入少量的丙酮酸钠和亚油酸，可以加快细胞的增殖速度，保持细胞的生长活性。

优选地，所述氨基酸包含的种类及各种类在培养基中的含量为：甘氨酸10-100mg/L、L-丙氨酸1-20mg/L、L-精氨酸盐酸盐10-500mg/L、L-天冬酰胺1-20mg/L、L-天冬氨酸1-20mg/L、L-半胱氨酸盐酸盐10-100mg/L、L-胱氨酸10-100mg/L、L-谷氨酸1-20mg/L、L-谷氨酰胺100-2000mg/L、L-组氨酸盐酸盐10-100mg/L、L-异亮氨酸20-200mg/L、L-亮氨酸20-200mg/L、L-赖氨酸盐酸盐20-200mg/L、L-蛋氨酸10-100mg/L、L-苯丙氨酸20-200mg/L、L-脯氨酸10-100mg/L、L-丝氨酸10-100mg/L、L-苏氨酸20-200mg/L、L-色氨酸1-30mg/L、L-酪氨酸二钠盐20-200mg/L、L-缬氨酸20-200mg/L。

上述氨基酸的种类和含量的设置，可使细胞在培养基中高效合成活性产物。

优选地，所述核苷酸包含的种类及各种类在培养基中的含量为：腺嘧啶脱氧核苷酸0.001-1mg/L、次黄嘌呤钠0.1-50mg/L。