[发明专利]一种检测转基因BT蛋白和CP4-EPSPS蛋白的联检胶体金试纸条

说明书

一种检测转基因BT蛋白和CP4‑EPSPS蛋白的联检胶体金试纸条，其包括底板、固定在底板上依次相连的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；其中，结合垫上包被金标抗体复合物AuNPs‑BTmAb1和AuNPs‑CP4mAb1；硝酸纤维素膜上设质控线和两条检测线。该联检试纸条可以对含转基因抗虫蛋白BT‑Cry1Ab、BT‑Cry1Ac、BT‑Cry1Ab/Ac融合蛋白或抗除草剂蛋白CP4‑EPSPS的农作物同时快速检测，结果准确，具有良好的特异性和较高的灵敏度，降低对仪器及专业操作人员的依赖，克服单一靶标试纸条检测复合性状作物，或检测单一性状作物的复合物时的局限性，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于转基因蛋白检测领域，具体涉及一种检测转基因BT蛋白和CP4-EPSPS蛋白的联检胶体金试纸条。

背景技术

截止2017年，全球转基因作物的种植面积达到2.0亿公顷，相比于1996年的170万公顷，转基因作物的种植面积增加了100倍之多，转基因抗虫作物及转基因抗除草剂作物是转基因作物中最重要的两种类型，主要通过在植物的基因组中插入外源Bt基因(来源于土壤细菌Bacillussubtilis)与抗草甘膦基因CP4-epsps及抗草铵膦基因bar/pat。

在转基因种植产业如此快速发展的形势下，转基因作物及其产品的安全性一直是人们关注的焦点，特别是转基因产品对人及动物的健康，以及对生态环境的影响受到广泛关注。许多国家对转基因原料生产的产品实行强制标记措施，但转基因作物非法种植及流转到超市的情况也偶有发生，为实现转基因产品的安全及有效管理，需要相关生产者及检测机构对转基因作物的种植进行有效监控。

目前，转基因产品的主要检测方法可分为两类：一类是基于外源蛋白质靶标的蛋白质检测方法；另一类是基于核酸靶标的核酸检测方法。

基于核酸的检测主要有常规PCR法，巢式PCR法，荧光定量PCR法等，此类方法检测稳定性以及灵敏度均较高，但该方法需要精密的热循环仪及一系列试剂、耗材，需要在配备齐全的实验室中进行。

以抗原-抗体为基础的免疫学方法可通过检测外源基因表达的蛋白来定性、定量检测转基因产品，这类检测方法主要有Western Blot、ELISA法和免疫试纸条法等；而Western Blot及ELISA法需要较繁琐的操作步骤及较长的孵育时间，检测结果需要仪器判读，并不适用于田间现场、仓储等场所的快速检测使用；免疫试纸条法操作简单，检测结果肉眼可见，检测只需要5～10min，不需要使用仪器等，将在现场快速检测及大规模筛查上起重要作用。

随着生物技术中转基因技术的不断发展，转基因作物也从单一性状向复合性状发展，截止到2017年，复合性状的玉米占转基因玉米的77％，复合性状的棉花占80％，而目前，用于转基因作物检测的胶体金试纸条多为单一靶标的检测形式，不能满足多性状转基因作物及单一性状作物的复合物检测的需求。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种检测转基因BT蛋白和CP4-EPSPS蛋白的联检胶体金试纸条，用于三种靶标蛋白的检测，对含BT-Cry1Ab蛋白、BT-Cry1Ac蛋白或BT-Cry1Ab/Ac融合蛋白与CP4-EPSPS蛋白的转基因作物进行快速同时检测，降低对仪器及专业操作人员的依赖，克服单一靶标试纸条检测复合性状作物，或检测几种单一性状作物的复合物时的局限性，具有良好的应用前景。

为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种检测转基因BT蛋白和CP4-EPSPS蛋白的联检胶体金试纸条，其包括底板、固定在底板上依次相连的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；