[发明专利]一种评价百合花朵形态特征与花粉发育阶段相关性的方法

说明书

本发明属于百合生殖生物学研究领域，公开了一种评价百合花朵形态特征与花粉发育阶段相关性的方法，该方法包括：(1)分别测量不同生长时期百合的花蕾、花药、雄蕊长度；(2)同时观察记录不同生长时期百合花药发育的颜色变化；(3)取经过步骤(1)和(2)处理后的百合花蕾鲜样，剥出花药，用改良的苯酚品红染色液，染色压片观察小孢子发育过程，确定其花粉发育阶段；(4)观察分析花粉发育阶段与花器官形态的联系。本发明的方法，通过花蕾大小、花药大小、花药颜色等生理指标即可确定百合发育所处时期，可为今后评价百合科研及生产取样等提供重要参考标准，也为两种东方百合的花药培养和遗传育种等方面的研究提供基础的依据。

技术领域

本发明属于百合生殖生物学研究领域，涉及一种评价百合花朵形态特征与花粉发育阶段相关性的方法及应用，具体涉及‘木门’和‘西伯利亚’两种东方系百合的小孢子发育和花器官形态相关联系的评价方法。

背景技术

百合花朵硕大、花色艳丽、芳香怡人，栽培及应用历史悠久。目前，百合已成为世界五大鲜切花之一，在世界鲜切花市场占有十分重要的地位，在园林中运用也越来越广泛。缩短育种周期和提高育种效率的新途径之一是单倍体育种，通过小孢子或大孢子诱导生成单倍体植株，加倍生成纯合的二倍体，选择后育成新品种的即为单倍体育种。而花药离体培养的试验经验证明，必须选择发育时期适宜的小孢子才能提高再生植株的诱导率。‘西伯利亚’和‘木门’的研究主要集中在繁殖生物学和组织培养等方面。因此，有必要分析‘西伯利亚’和‘木门’的小孢子发育时期与花器内、外部的关系，为直接判断小孢子的发育时期提供确定依据，为两种东方百合的花药培养和遗传育种等方面的研究提供基础的依据，也为专业生产处理提高参考依据。

发明内容

本发明的目的是通过测量两种百合生长周期的生理指标，加上细胞学观察分析，建立一种评价百合花朵形态特征与花粉发育阶段相关性的方法，并对该方法开展了相关应用，旨在为本地区百合生产科研取样等研究提供理论依据。

本发明的目的通过以下技术方案实现的：

一种评价百合花朵形态特征与花粉发育阶段相关性的方法，包括以下步骤：

(1)分别测量不同生长时期百合的花蕾、花药、雄蕊长度；

(2)同时观察记录不同生长时期百合花药发育的颜色变化；

(3)取经过步骤(1)和(2)处理后的百合花蕾鲜样，剥出花药，用改良的苯酚品红染色液，染色压片观察小孢子发育过程，确定其花粉发育阶段(造孢细胞时期、花粉母细胞时期、减数分裂时期、单核时期和成熟花粉粒时期)；

(4)观察分析花粉发育阶段与花器官形态的联系。所述的花器官形态为花蕾长度、花药长度、雌蕊长度以及花药颜色。

作为一种优选技术方案，步骤(1)中每份资源随机选取5株百合的5个花蕾，用电子游标卡尺测量，记录每个花蕾、花药和雄蕊长度；步骤(2)中每份资源随机选取3株百合的3个花蕾，观察记录每个花蕾中花药的颜色；步骤(1)和步骤(2)的操作均需用相机拍照纪录。

用于拍照记录的花蕾、花药、雌蕊和雄蕊均来自于同取样株长势一致、大小时期相同的植株。解剖花蕾时借助解剖针等工具，防止破坏花蕾及其完整结构。拍照先后顺序为：花蕾、解剖结构(雌蕊、雄蕊)。

作为一种优选技术方案，步骤(3)中每份资源随机选取3株百合的3个花蕾，剥取3个花药，用改良的苯酚品红染色液压片染色，记录小孢子时期。

进一步优选的，步骤(3)中取鲜样方法是：带冰盒去生产试验基地现取，随即返回实验室进行处理，时间差距短，保证试验准确性。用改良的苯酚品红染色液(市售，又称卡宝品红染色液)压片染色的过程为：将鲜花药置于载玻片中央，用解剖针挤压出花药内容物，滴一滴染色液，静置0.5～2min，除却材料杂质，压片，最后用OLYMPUS BX41显微镜观察，调节焦距和视野，使视野清晰，拍照记录。该染色压片方法简便，效果直观。