[发明专利]一种用于检测转hrf2基因抗病大豆B1A9130的侧翼序列及其检测方法

说明书

本发明公开了一种用于检测转hrf2基因抗病大豆B1A9130的侧翼序列及其检测方法，本发明首次分离了抗病转基因大豆B1A9130外源插入片段左、右边界侧翼序列。本发明同时公开了利用抗病转基因大豆B1A9130外源插入片段和侧翼序列开发的引物组合和特异性检测方法。本发明公开的侧翼序列及检测方法适用于对抗病转基因大豆B1A9130包括亲本、衍生品系的特异性检测，实现了对转基因大豆及其产品的有效监管。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于检测转hrf2基因抗病大豆B1A9130的侧翼序列及其检测方法。

背景技术

大豆是世界上最重要的油料作物和高蛋白粮食作物之一，也是人类植物性蛋白和油脂的重要来源。大豆疫霉根腐病是由卵菌纲病原-大豆疫霉菌(Phytophthora sojae)引起的一种大豆毁灭性病害。全球每年因大豆疫霉根腐病造成的经济损失达10-20亿美元。自1989年在黑龙江地区首次发现大豆疫霉根腐病以来，该病害在我国大豆主要产区的发生和危害逐步加重。一般发病率在5％左右，感病品种减产25％-50％，高感品种可达90％以上，甚至绝产，对我国大豆生产造成严重的威胁。目前已在抗性大豆资源中发现18个大豆疫霉菌抗性位点(Rps，resistance to P.soja)，但这些抗性位点一般都具有小种特异性。大豆疫霉菌生理小种的多样性及快速变异极易导致原有抗性的丧失。因此，进一步拓宽大豆抗性遗传基础，对于提高大豆疫霉菌抗性水平和持久抗性具有重要的意义。

随着生物技术的发展，转基因技术已广泛应用于农作物重要性状的改良，包括抗除草剂、抗虫、抗病、品质改良、耐逆等。全球转基因作物种植面积从1993年的170万公顷增长到2016年的1.85亿公顷，其中，转基因大豆依然是种植最广泛的转基因作物，累计种植面积已达10亿公顷。虽然我国自主研发的转基因大豆产品尚未进入商业化应用，但随着研发逐步推进，多个转基因大豆品系包括抗除草剂、抗虫、抗病转基因大豆已陆续进入到环境释放和生产性试验阶段。吉林省农业科学院采用农杆菌介导法将来源于水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola)的hrf2基因导入栽培大豆品种沈农9号(国审豆2007015)，获得高抗疫霉根腐转基因大豆事件B1A9130。连续3代抗性鉴定结果表明，在接种大豆疫霉菌1号生理小种后，B1A9130叶片表现轻微的黄化，存活率为89.80-92.86％，而对照非转基因大豆品种则表现出叶片黄化、植株萎蔫和死亡等典型的疫霉根腐病症状，其存活率仅为38.50-40.37％。目前该转基因事件已进入环境释放阶段，随着国家转基因生物新品种培育重大专项的推进，该转化事件及其衍生品种或品系有望进入商业化应用。

对转基因事件及其衍生品系或品种特异性检测，是实现转基因植物有效监督管理，保障转基因产业健康发展的重要技术手段。外源插入片段的侧翼序列和根据此侧翼序列建立的检测方法，是对转基因植物及其产品进行有效监管的一个重要依据。目前已经有相关专利和文献报道了转基因植物外源插入侧翼序列。张大兵等(2006)利用TAIL-PCR方法分析了玉米品系MON863的外源插入片段的侧翼序列，建立了转基因MON863玉米的品系特异性检测方法。谢家建等(2007)利用TAIL-PCR、genome walking和LD-PCR等方法获得了转基因水稻克螟稻、Bt汕优863和科丰6号的外源插入片段的侧翼序列，杨正友等(2012)利用TAIL-PCR方法建立了转基因水稻品系SK-2的外源插入片段的侧翼序列，并建立了该品系特异性的检测方法。对现有专利和文献进行分析，尚未发现关于转hrf2基因抗病大豆B1A9130外源插入片段侧翼序列相关的文章和专利报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测转hrf2基因抗病大豆B1A9130的侧翼序列，本发还提供一种利用抗病转基因大豆B1A9130外源插入片段和侧翼序列开发的引物组合及特异性检测方法。

本发明是通过以下技术方案实现的。